Дифференцировка индуцированных нейральных клеток-предшественников в астроциты

Возьмите культуру индуцированных нейральных клеток-предшественников, или iNPC, на многолуночной пластине, покрытой белком внеклеточного матрикса.

Замените среду на глиальную индукционную среду и инкубируйте. Факторы роста и гормоны в средах способствуют дифференцировке iNPC в глиальные клетки-предшественники.

Меняйте среду через день для пролиферации клеток. Затем замените среду на астроцитарную среду и инкубируйте.

Специфические питательные вещества и факторы роста в среде стимулируют дифференцировку клеток-предшественников глии в астроциты.

Изменения в средствах массовой информации через день способствуют созреванию астроцитов.

Меняйте среду на нейро-дифф-среду, когда клетки слились примерно на 70%, и продолжайте менять среду через день в течение трех недель. Не расщепляйте клетки во время дифференцировки. Через три недели клетки должны экспрессировать нейрональный маркер TuJ1.

Чтобы получить более зрелые нейроны и нейронные подтипы, продолжайте дифференцировку до трех месяцев. Для дифференцировки iNPC в направлении глиальной линии измените среду для индукции глии, включая 20 нанограммов на миллилитр эпидермального фактора роста, чтобы индуцировать дифференцировку в глиальные клетки-предшественники. Удалите половину среды и заменяйте ее свежей через день в течение примерно двух недель.

В течение этого периода клетки должны быть разделены от 1 до 3 в присутствии 10 микромолярного ингибитора рокиназы при достижении 100% конфлюенции. Через две недели дифференцируйте клетки в астроциты, меняя среду на коммерчески доступную среду астроцитов, когда клетки почти сливаются, и продолжая менять среду каждый второй день. Примерно через семь дней клетки начинают экспрессировать маркеры астроцитов.