Энциклопедия экспериментов JoVE
Neuroscience
0 просмотров • 2:26 мин. • July 8th, 2025
Возьмем, к примеру, индуцированные человеком нейроны, или iN, культивируемые на внеклеточном матриксе.
Удалите среду и добавьте пищеварительные ферменты, которые нарушают работу матрикса, диссоциируя клетки.
Переложите внутримышечные имплантаты в трубку. Центрифугируйте суспензию и выбросьте надосадочную жидкость, содержащую ферменты.
Ресуспендируйте iN в среде для совместной культивирования; перенесите их в культуру индуцированных клеток-предшественников олигодендроцитов, или iOPC.
iOPC являются предшественниками олигодендроцитов, которые образуют миелиновые оболочки вокруг аксонов нейронов.
После инкубации iOPC образуют синаптические связи с iN. Трофические факторы, высвобождаемые iOPC и факторами роста в этой среде, способствуют созреванию iN в нейроны, демонстрируя усиление клеточных процессов, которые формируют синаптические связи с другими нейронами.
Электрическая активность зрелых нейронов и факторов роста в среде индуцирует созревание iOPC в олигодендроциты.
Олигодендроциты удлиняют клеточные отростки, образуя миелиновые оболочки вокруг аксонов нейронов.
Созданная сокультура готова к анализу.
На 14-й день планшет iOPC с плотностью 1 x 10 5 клеток на лунку в 24-луночном планшете в среде для дифференцировки OPC. На следующий день отсоедините индуцированные нейроны человека раствором для отслойки клеток. Добавляйте нейроны к культивируемым OPC, располагая плотность посадки 2 x 105 клеток на лунку. Используйте среду для совместного культивирования, содержащую нейробазальную среду А, 2% добавку B-27 и трийодтиронин T3 в концентрации 100 нанограмм на миллилитр. Меняйте среду на следующий день, а затем через день. Если OPC пролиферируют слишком быстро и достигают слияния менее чем за три дня, добавьте от 2 до 5 микромоляров Ara-C.