Энциклопедия экспериментов JoVE
Neuroscience
0 просмотров • 2:01 мин. • July 8th, 2025
Возьмите чашку Петри с полимерным покрытием.
Добавьте линию олигодендроцитов или клетки ОЛ в подходящую питательную среду и инкубируйте.
Положительный заряд на полимерном покрытии притягивает отрицательно заряженную клеточную мембрану, усиливая прикрепление клеток к чашке. Факторы роста и питательные вещества в этой среде способствуют росту клеток.
Замените среду на бедную питательными веществами среду и инкубируйте.
Низкий уровень питательных веществ вызывает легкий стресс в клетках, заставляя их выделять белки, липиды и другие молекулы, включая факторы роста и цитокины, во внеклеточное пространство.
Соберите среду в пробирку.
Фильтр простерилизует среду для удаления клеточного мусора и нерастворимых компонентов.
Фильтрат, содержащий растворимые биологически активные молекулы, секретируемые клетками ОЛ, называется средой, кондиционированной олигодендроцитами, или ОКМ.
Храните ОКМ при более низких температурах до дальнейшего использования, чтобы предотвратить деградацию белков и других молекул, тем самым сохраняя эффективность ОКМ.
Тарелка две-три предварительно покрыты 100-миллиметровыми чашками Петри 10 миллилитровыми клеточными суспензиями.
Инкубируйте в увлажненном инкубаторе при температуре 37 градусов Цельсия под 5% углекислого газа.
В ламинарном вытяжном шкафу в стерильных условиях обновляют питательную среду 10 миллилитрами теплой Mbb 27 низкой среды.
Инкубировать в течение 2 дней в увлажненном инкубаторе при температуре 37 градусов Цельсия под 5% углекислым газом.
Чтобы получить ОКМ, соберите надосадочную жидкость, содержащую факторы, секретируемые олигодендроцитами. Простерилизуйте OCM с помощью фильтра 0,22 микрона.