Усиление дифференцировки стволовых клеток с помощью транзиентного лечения ДМСО

Начните с многолуночного планшета, содержащего адгезивные человеческие плюрипотентные стволовые клетки со способностью к многолинейной дифференцировке.

Введите среду для стволовых клеток, содержащую диметилсульфоксид или ДМСО.

ДМСО проникает в клетки и препятствует прогрессированию клеточного цикла из фазы Gap 1, или G1, начальной стадии клеточного цикла, в фазу синтеза, или фазу S.

Это создает однородную популяцию клеток в фазе G1, усиливая их способность к дифференцировке.

Замените среду богатой питательными веществами эктодермальной дифференцировочной средой, содержащей ингибиторы сигнальных путей BMP и TGF-β.

Эти ингибиторы связываются со специфическими рецепторами ALK на стволовых клетках, блокируя сигнальные пути BMP и TGF-β и предотвращая их дифференцировку в предшественники энтодермы и мезодермы.

Это позволяет селективно дифференцировать G1-арестованные стволовые клетки в эктодермальные предшественники, обладающие способностью к нейронной дифференцировке.

Регулярно заменяйте среду свежей средой для поддержания уровня питательных веществ и фактора дифференцировки, обеспечивая выживание клеток.

Предварительно обработайте клетки ДМСО, как описано для 2D-культур, и приготовьте растворы Noggin и SP431542 исходного материала. Приготовьте достаточное количество 10% нокаутирующей сыворотки или KOSR in knockout DMEM для трех-четырех дней смены среды. Приготовьте эктодермальные дифференцировочные среды, добавив Noggin и SP431542 к предварительно подогретому KOSR knockout DMEM, как описано в рукописи.

После предварительной обработки ДМСО аспирируйте среду из клеток и добавьте по 2 миллилитра дифференцировочной среды в каждую лунку. Дайте клеткам инкубироваться в течение трех-четырех дней при температуре 37 градусов Цельсия в инкубаторе с углекислым газом, ежедневно заменяя среду свежими факторами дифференцировки.