Получение горизонтальных срезов мозга гиппокампа мыши

Возьмите полушария мозга мыши в растворе с высоким содержанием сахарозы. Закрепите полусферы вентральной стороной вверх на вибратомной пластине образца с помощью клея.

Перенесите пластину с образцом в камеру для нарезки.

Добавьте полузамороженный раствор с высоким содержанием сахарозы для поддержания физиологического состояния ткани и затвердевания клея.

Подайте смесь углекислого газа и кислорода для поддержания оксигенации тканей.

Используя заданные параметры, получаем исходные срезы и удаляем их. Далее получаются горизонтальные срезы гиппокампа.

Осторожно перенесите эти срезы мозга в камеру, содержащую ACSF, для восстановления тканей.

Горизонтальные срезы гиппокампа готовы к дальнейшим экспериментам.

Поместите оба полушария на только что вырезанную дорсальную сторону вентральной частью мозга вверх и нанесите каплю суперклея на пластину для образца. С помощью наконечника для пипетки распределите клей по большой площади, чтобы вместить оба кусочка ткани, и коснитесь ремешка из фильтровальной бумаги на вентральной стороне одного полушария. Используйте еще один ремешок из фильтровальной бумаги, чтобы осторожно наполовину высушить дорсальную сторону мозга, и положите полушарие дорсальной стороной вниз на клей на пластине для образца.

С помощью двух дополнительных лент фильтровальной бумаги расположите второе полушарие на клее, как показано выше, и поместите пластину с образцом в камеру для нарезки. Затем быстро, но осторожно накройте тарелку ледяным раствором для слайсов с высоким содержанием сахарозы. Чтобы получить участки мозговой ткани, расположите вибратомное лезвие перед медиальной стороной полушарий и поднимите вибратомный стол так, чтобы лезвие находилось на той же высоте, что и вентральные стороны полушарий, которые теперь обращены вверх.

С помощью вибратома опустите лезвие на 600 мкм дальше в дорсальном направлении, и разрежьте ткань до тех пор, пока первые два среза полностью не отделятся от двух полушарий. Когда первые два среза ткани будут получены, измените направление резки и опустите лезвие еще на 300 микрон, прежде чем снова нарезать. Когда гиппокамп станет видимым, с помощью расширенной пластиковой пипетки Пастера соберите и перенесите срезы в камеру восстановления на водяной бане.