Энциклопедия экспериментов JoVE
Neuroscience
0 просмотров • 2:59 мин. • July 8th, 2025
Закрепите трансгенный ломтик мозга мыши в записывающей камере, перфузированной кислородосодержащим аCSF.
Более толстая клиновидная сторона содержит корешок слухового нерва и кохлеарное ядро, включая Т-звездчатые и шаровидные кустистые клетки.
Более тонкая сторона содержит медиальное и вентральное ядро трапециевидного тела с флуоресцентными медиальными оливокохлеарными нейронами.
Микроскопически локализуют корешок слухового нерва и располагают на нем стимулирующий электрод.
Определите флуоресцентный медиальный оливокохлеарный нейрон и продвиньте к нему записывающую пипетку.
Заплатите нейрон, чтобы получить конфигурацию всей клетки и записать его электрическую активность.
Подавайте электрические импульсы на корешок слухового нерва, активируя клетки кохлеарного ядра.
Активированные Т-звездчатые клетки высвобождают возбуждающие нейротрансмиттеры в медиальные оливокохлеарные нейроны.
Тем не менее, глобулярные кустистые клетки активируют тормозные пути, высвобождая тормозные нейротрансмиттеры в медиальные оливокохлеарные нейроны.
Интеграция возбуждающих и тормозных сигналов приводит к образованию постсинаптических токов, подтверждающих активность нейронов в срезе.
Чтобы настроить срез клина для электрофизиологического анализа, поместите образец в записывающую камеру, которая непрерывно перфузируется с температурой 35 градусов Цельсия aCSF, и стабилизируйте срез. Используя оптику ДВС, сосредоточьтесь на корешке слухового нерва на толстой стороне среза и с помощью микроманипулятора переместите биполярный вольфрамстимулирующий электрод к корешку слухового нерва и аккуратно вдавите его на поверхность ткани.
Переместите поле зрения на вентральное ядро трапециевидного тела на тонкой стороне и выберите медиальный оливокохлеарный нейрон в качестве мишени для электрофизиологии в условиях эпифлуоресценции с использованием 561-нанометрового эмиссионного фильтра. Заполните записывающую пипетку подходящим внутренним раствором для предполагаемого эксперимента, а под оптикой DIC заплатите и запишите с медиального оливокохлеарного нейрона в цельноклеточной конфигурации.
Отрегулируйте амплитуду электростимуляции корешка слухового нерва для получения устойчивых постсинаптических событий в медиальном оливокохлеарном нейроне. Затем запустите соответствующие протоколы стимуляции, чтобы наблюдать за вызванными синаптическими токами в медиальных оливокохлеарных нейронах.