Энциклопедия экспериментов JoVE
Neuroscience
0 просмотров • 2:58 мин. • August 7th, 2025
Возьмите кварцевую микроиглу с индивидуальными отверстиями, прикрепленную к шприцу, наполненному водой, и подключенную к микронасосу для контроля скорости доставки.
Возьмите защищенную крысу под наркозом с открытым местом инъекции.
Расположите микроиглу и поместите под нее парафиновую пленку. Нанесите на него каплю раствора для инъекций.
Втяните воду, чтобы образовался пузырь воздуха, затем опустите микроиглу, чтобы набрать раствор.
Дайте капле образоваться, обеспечив свободный проход.
Используйте острую иглу, чтобы проколоть мембрану мозга.
Вводите микроиглу с низкой скоростью доставки, чтобы предотвратить проникновение фрагментов ткани внутрь иглы.
После того, как вы расположитесь, идите немного глубже. Остановите подачу и поднимите ее снова, чтобы избежать обратного потока.
Начните доставку с увеличенной скоростью. Отверстия в игле обеспечивают оптимальное распределение вводимого раствора.
Подождите достаточно времени перед извлечением иглы, чтобы облегчить диффузию.
Отрежьте небольшой кусочек пластиковой парафиновой пленки и положите его на череп. С помощью пипетки объемом 10 микролитров сделайте каплю раствора и нанесите на пластиковую парафиновую пленку. Остановите насос. Слегка оттяните толкатель насоса и создайте небольшой пузырь воздуха в капилляре, осторожно потянув за поршень шприца для микроинъекций.
Опустите кончик иглы до тех пор, пока он не достигнет капли. Возьмите образец, очень медленно потянув за поршень шприца для микроинъекций, не допуская образования пузырьков. Установите на место толкатель насоса, контактирующий с поршнем, и включите насос со скоростью расхода 0,3 микролитра в минуту.
Затем дождитесь образования капли, прежде чем приступать к следующему этапу. После этого уменьшите расход до 0,1 микролитра в минуту. Надрежьте твердую мозговую оболочку иглой со скошенным кончиком из нержавеющей стали и медленно опустите иглу, чтобы ввести ее в ткани мозга. Когда нужное положение будет достигнуто, опуститесь еще на 0,1 миллиметра, после чего остановите насос.
Поднимите стереостатический рычаг на 0,1 миллиметра и снова запустите насос со скоростью 0,3 микролитра в минуту. После этого запускаем таймер и инъекцию. Следите за движением пузырьков во время инъекции. В конце остановите насос и подождите пять минут, прежде чем медленно извлекать иглу.