Разработка микротканеинженерной нейронной сети с использованием микроколонки на основе гидрогеля

Начните с чашки, содержащей микроколонку. Микроколонка имеет гидрогелевую внешнюю оболочку и внеклеточный матрикс, или ядро ВКМ.

Добавьте капли питательной среды в ту же посуду.

Перенесите агрегаты нейронных клеток в чашку, затем поместите их в одну из средних капель.

Наблюдайте под стереомикроскопом и вставляйте клеточные агрегаты на обоих концах микроколонки.

Затем перенесите засеянный микростолбик в среду для клеточной жизнеспособности.

Инкубируйте для присоединения клетки к ВКМ.

С помощью стереомикроскопа подтвердите прикрепление клеток. Затем добавьте питательную среду, чтобы накрыть чашку, и инкубируйте.

Прикрепленные нейроны начинают расширять свои аксоны через ВКМ.

Регулярно заменяйте полусреду свежей средой для поддержания уровня питательных веществ.

Со временем аксоны разрастаются и охватывают всю длину микроколонки, образуя нейронные сети.

Разработанная микротканевая нейронная сеть готова к реконструкции поврежденной нейронной схемы.

Приступайте к посеву клеток сразу после инкубации. Перенесите примерно от 10 до 20 микролитров питательной среды в две свободные области в чашках Петри, где находятся микроколонны. С помощью микропипетки соберите нейронные агрегаты по отдельности и перенесите их в чашку Петри, содержащую конструкции. Переместите агрегаты с помощью щипцов в один из небольших бассейнов питательной среды, чтобы сохранить здоровье клеток.

При наблюдении под стереомикроскопом используйте щипцы для введения агрегата на одном конце микроколонок для однонаправленных микро-ТЭНов или на каждом конце для двунаправленной архитектуры. Затем переместите засеянный микростолбец в другой небольшой бассейн питательной среды, чтобы избежать обезвоживания и сохранить здоровье агрегата. Когда все микроколонны будут загружены, инкубируйте при температуре 37 градусов Цельсия и 5% углекислого газа в течение 45 минут, чтобы заполнители могли прилипнуть к ECM.

После инкубации с помощью стереомикроскопа убедитесь, что агрегаты остаются на концах микростолбиков. Наконец, осторожно залейте чашки Петри, содержащие микро-ТЭННы, питательной средой с помощью пипетки. Поместите посуду в инкубатор при температуре 37 градусов Цельсия и 5% углекислого газа для длительного выращивания.