JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Microbiology
0 görüntülenme • 2:18 dk. • September 26th, 2025
Kükürt açısından zengin bileşikleri metabolize edebilen çeşitli hidrojen sülfür üreten bakterilerin bir süspansiyonunu içeren bir plaka ile başlayın.
Kükürt kaynağı olarak L-sistein içeren bir bizmut klorür çözeltisi ekleyin ve karışımı kısa süre inkübe edin.
İnkübasyon sırasında bakteriler L-sistein kullanır ve bizmut iyonlarıyla reaksiyona girerek çözünmeyen bir siyah bizmut sülfür çökeltisi oluşturan hidrojen sülfür üretir.
Bu reaksiyon, çözeltinin rengini açık sarıdan siyaha değiştirerek hidrojen sülfür üretimini gösterir.
Daha sonra, hidrojen sülfür standardı olarak değişen konsantrasyonlarda sodyum hidrosülfür kullanarak tahlili gerçekleştirin ve bizmut klorür ekleyin.
Bu, hidrojen sülfür seviyelerini temsil eden, açıktan yoğun siyaha kadar değişen bir renk gradyanı oluşturur.
Şimdi, bakteri numunelerindeki hidrojen sülfür seviyelerini görsel olarak karşılaştırmak ve tahmin etmek için bu gradyanı kullanın, böylece hidrojen sülfür üreten bakterilerin hızlı bir şekilde tespit edilmesini sağlayın.
100 mikrolitre bakteri kültürünü 100 mikrolitre yeni hazırlanmış bizmut çözeltisiyle 96 oyuklu mikrotitre plakalarında karıştırın ve 20 santigrat derecede 37 dakika kültürleyin. Her bakteri suşu için analizi üç kopya halinde gerçekleştirin.
20 dakika sonra renk değişimini kontrol edin. Çözeltinin rengi açık sarıdan siyaha değişirse, bu bakterinin hidrojen sülfür veya H2S üretebildiğini gösterir. Bu ölçümü üç kez tekrarlayın.
Bizmut sülfür çözeltisi ile karıştırılmış farklı konsantrasyonlarda sodyum hidrosülfür kullanarak yöntemin hassasiyetini belirleyin. Son olarak, siyah bizmut sülfür çökeltisinin oluşumunu gözlemleyerek bisülfür ve sülfür iyonlarının varlığını belirleyin. Renksiz üretimden en koyu siyah renk üretimine kadar görsel bir ölçek kullanarak kuyucukların rengini puanlayın.