İnsan Norovirüsünün Bakteri Kaynaklı Rekombinant P Alanı Proteinlerinin Saflaştırılması

Gözenekli küresel jel boncuklarla dolu bir boyut dışlama kromatografi kolonu alın.

Kolonu, ayırma sırasında proteinlerin yapısal bütünlüğünü koruyan bir tamponla dengeleyin.

Rekombinant olarak eksprese edilmiş insan norovirüs P alanı proteinleri ve kalıntı protein safsızlıkları içeren saflaştırılmış bir bakteri özütü yükleyin.

Örneği sütundan geçirmek için arabelleği ekleyin.

Büyük kalıntı safsızlıklar gözeneklere giremez ve boncuklar arasındaki boşluklardan geçemez, önce dışarı çıkar.

UV absorbansı kullanarak elüsyonun izlenmesi. Küçük bir tepe noktası, kolondan çıkan safsızlıkları gösterir.

Buna karşılık, küçük P alanı proteinleri boncuk gözeneklerine girer, daha uzun bir yol kat eder ve daha sonra ayrışır. Absorbans zirvesindeki bir artış, P alanı proteinlerinin elüsyonunu gösterir.

Artık daha fazla analiz için hazır olan P alanı proteinlerini içeren ayrıştırılmış fraksiyonları toplayın.

Yüksek performanslı sıvı kromatografisi arıtma sisteminin pompalarını ve borularını yıkayın ve boyut dışlama kromatografisi kolonunu jel filtrasyon tamponu ile önceden dengeleyin. Konsantre numunenin hacmine bağlı olarak bir süper döngü veya döngü kullanarak P alanını dakikada bir mililitre akış hızında kolona enjekte edin. Enjeksiyon bittikten sonra akış hızını dakikada 2,5 mililitreye yükseltin.

Optik yoğunluk arttıkça ve P alanı kolondan çıktıkça, 1,5 mililitrelik kesirleri toplayın. P alanı genellikle bir dimer olarak ayrıştırılır.