JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Microbiology
0 görüntülenme • 2:51 dk. • October 30th, 2025
Bir insan solunum yolu patojeni olan tiplendirilemeyen bir Haemophilus influenzae suşu ile başlayın.
Bakteri kültürünü besin açısından zengin seçici ortama çizin ve solunum yolu ortamını taklit etmek için CO2 ile zenginleştirilmiş koşullar altında inkübe edin.
Kuluçka sırasında bakteriler besinleri kullanır ve çoğalarak koloniler oluşturur.
Bir koloniyi seçici sıvı ortama aktarın ve sıvı kültürde bakteri üremesini teşvik etmek için inkübe edin.
Bir alikot bir mikrosantrifüj tüpüne aktarın.
Bakterileri ayırmak ve süpernatanı atmak için santrifüjleyin.
Bakterileri bir tamponda yeniden süspanse edin, bakterileri yıkamak ve ayırmak için tekrar santrifüjleyin ve artık ortam içeren süpernatanı atın.
Bakterileri tamponda yeniden süspanse edin ve seyreltin.
Bir spektrofotometre kullanarak, bakteri konsantrasyonunu tahmin etmek için optik yoğunluğu 600 nm'de ölçün.
Seyreltilmiş bakteri kültürünü seçici ortama koyun ve koloniler oluşturmak için inkübe edin.
Aşıyı ileride kullanmak üzere hazırlamak için koloni oluşturan birimleri hesaplamak için kolonileri sayın.
NTHI'yi bir çikolatalı agar tabağına koyun. Plakayı gece boyunca 37 santigrat derecede %5 karbondioksit ile baş aşağı inkübe edin. Ertesi gün, bakterileri bir beyin-kalp infüzyon suyunda kültürleyin.
Ardından, bir mikrosantrifüj tüpüne bir mililitre et suyu ekleyin. Karışımı oda sıcaklığında beş dakika boyunca 4.000 g'da döndürün. Ardından, süpernatanı atın ve peleti bir mililitre PBS'de yeniden süspanse edin. Bu yıkama adımını bir kez daha tekrarlayın.
Daha sonra, 100 mikrolitre yeniden süspanse edilmiş çözeltiyi 900 mikrolitre PBS içinde seyreltin ve kültürün absorbansını 600 nanometrede ölçün. Aşıyı mililitre başına 20 milyon CFU'ya ayarlamak için bu bilgiyi kullanın.
Ardından, aşının canlılığını ve CFU'larını belirleyin. Et suyunun bir ila on seri seyreltmesini çikolatalı agar plakaları üzerinde kültürleyin ve plakaları gece boyunca inkübe edin.