JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Microbiology
0 görüntülenme • 1:28 dk. • January 30th, 2026
Öncelikle E. coli dahil olmak üzere fekal koliform barındırma ihtimali olan kontamine su örneğiyle başlayın.
Bulanıklığı ve mikrobiyal yükü azaltmak için distile suda seri seyreltme işlemi yapılabilir.
İstediğiniz seyreltilmiş örneği besin ortamıyla karıştırın ve mikrofluidik bir çipe yükleyin.
Vakum filtreleme kullanarak çipin serpantin kanalındaki bir membranda bakterileri yakalayın.
Üst odaya besin ortamı ekleyin ve bakteriyel iyileşmeyi artırmak için kuluçka yapın.
Ortamı, lusiferaz genini taşıyan E. coli-spesifik fajlardan oluşan bir çözelti ile değiştirin.
enfeksiyonuna izin vermek için kuluçka yapın; burada faj DNA'sı çoğalır, konak DNA'sını parçalar ve yeni fajlar oluştururken lusiferaz üretir. Sonrasında enfekte hücreler lusiferazı serbest bırakmak için liz yapar.
Lusiferazı yakalama membranına aktarmak için vakum filtrasyonu uygulayın.
Lusiferaz ile reaksiyona girerek parlak bir sinyal üreten bir substrat ekleyin.
Bir fotoçoğaltıcı tüp kullanarak, su örneğindeki canlı E. coli hücrelerinin sayısına orantılı olan lüminesansı ölçün.