JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Microbiology
0 görüntülenme • 2:23 dk. • March 31st, 2026
Bozunmuş ve bozulmamış ekzopolisakkaridler (EPS) içeren fermente süpernatantlarla başlayın.
Bu EPS, her süpernatanttaki farklı dışkı bakteri popülasyonlarının EPS üzerinde farklı şekilde etki ettiği fermantasyon sırasında elde edilir.
Üst yüzeyleri, polar sabit bir faz ile önceden kaplanmış ince katmanlı kromatografi plakasının tabanına yakın konumda tespit edin.
Plakayı hava ile kurutun, ardından sabit faza göre daha düşük polariteye sahip hareketli bir faz içeren bir odaya yerleştirin.
Mobil faz yükseldikçe, EPS polaritelerine ve büyüklüklerine göre göç eder.
Büyük, bozulmamış EPS, durağan fazla güçlü şekilde etkileşime girer ve köken yakınında kalır.
Daha küçük bozunmuş parçalar zayıf bağlanır ve hareketli fazla birlikte yukarıya doğru hareket eder.
Plakayı çıkarın ve hava ile kurutulun.
Plakayı, EPS ile reaksiyona giren karbonhidrat boyama reaktifine daldırın.
Plakayı hava ile kurut, sonra EPS'yi kurutmak ve renkli bantlar oluşturmak için ısıtın.
Köken yakınındaki tek bir bant, bozulmamış EPS'yi doğrularken, birden fazla bant bakteriler tarafından EPS bozulmasını doğrular.
Her önceden kaplanmış silika jel 60 TLC alüminyum plakaya 0,2 mikrolitre fermente edilmiş süpernatantlar yükleyin ve yayılmak için döndürün. Sonra, kurutmak için sıcak havalı saç kurutma makinesi kullanın.
Örneklenen plakaların bir ucunu 20 mililitre formik asit:n-butanol:su çözeltisine birkaç dakika batırın, elektroforez neredeyse diğer ucuna kadar uzanana kadar. Sonra tabakları forsepsle çıkar ve saç kurutma makinesiyle kurut. Sonra, tabakları iki dakika boyunca orsinol reaktifinde bekletin ve boyanıp tekrar kurusun.
Tabakları 120 derece sıcaklıkta fırına götürün ve üç dakika ısının. Sonra EPS'nin parçalanmasını TLC bantlarını ölçerek değerlendirmek için plakanın fotoğraflarını çekin.