Zenginleştirilmiş Sinek Örneklerinden Gıda Kaynaklı Patojenlerin PCR Tabanlı Tespiti

Hedef gıda kaynaklı patojenlere özgü PCR-hazır tabletler içeren polimeraz zincir reaksiyonu veya PCR tüplerini soğutulan PCR tüpü rafına yerleştirin.

Her tablet, hedefe özgü primerler, DNA polimeraz, dNTP'ler ve PCR reaksiyonunda kullanılan bir floresan boya içerir.

Reaksiyon karışımını oluşturmak için patojenik bakterilerden yüksek miktarda DNA içeren zenginleştirilmiş sinek lizatını ekleyin.

Buharlaşmayı önlemek için borupları optik kapaklarla kapatın.

PCR tüplerini termal döngüye yükleyin ve her hedef patojen için patojen-spesifik programlar kullanarak ayrı PCR çalışmaları yapın.

PCR sırasında DNA denatüre olur, primerler hedef diziye bağlanır ve amplifikasyon çift zincirli DNA üretir, bu DNA boyayı bağlayır ve floresans yayar.

Tekrarlayan döngüler üstel DNA amplifikasyonu ve artan floresansla sonuçlanır.

Cihaz, hedeflenen gıda kaynaklı patojenlerin örneğinde bulunmasını tespit etmek için floresansı gerçek zamanlı olarak takip eder.

PCR tabanlı tespite başlamak için önce bir soğutma bloğunda bir PCR tüp rafını soğutun. Daha sonra, hedef gıda kaynaklı patojenin PCR-hazır tabletlerini içeren ilgili PCR tüplerini tutucuya yerleştirin.

PCR tüplerindeki kapakları dikkatlice çıkarıp temizleme aracıyla atın. Her tüpün bir tablet içerdiğinden emin olun. Sonra, 50 mikrolitre lizat uygun PCR tüplerine aktarılır.

Kapatma aracı ile PCR tüplerine yeni optik kapakları sabitleyin. Reaksiyonlar bir kenara getirildikten sonra, PCR tüplerini PCR döngücü algılama sistemine yükleyin. Sonra programı çalıştırın ve sonuçları üreticinin protokolünde tarif edildiği gibi izleyin.