JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Immunology
0 görüntülenme • 2:50 dk. • July 8th, 2025
Hepatit B virüsü veya HBV'nin antijenlerine bağlanan reseptörlere sahip T hücrelerini alın.
T hücrelerini bir farenin kuyruk damarına enjekte edin.
Enjekte edilen hücrelerin karaciğerde yayılmasına izin verin.
Virüs enfeksiyonunu taklit etmek için, HBV genomunu taşıyan plazmitleri alın.
Plazmitleri hızla kuyruk damarına enjekte edin ve plazmitleri karaciğere yönlendirin.
Sıvının kuvveti damar endotelini geçirgen hale getirir ve hücrelerde geçici gözenekler oluşturur.
Plazmitler hücreye girer ve RNA sentezine girerek viral protein üretimi için kullanılan mRNA'yı üretir.
Bu proteinlerin bazıları viral antijenler olarak işlev görür.
Antijen sunan moleküller, viral antijenleri hücre yüzeyine taşır ve onları T hücrelerine maruz bırakır.
Bu bağışıklık hücreleri viral antijenlerle etkileşime girer ve enfekte olmuş hücreleri ortadan kaldırmak için mekanizmaları başlatır, viral protein toplanmasını ve yayılmasını engeller.
Kuyruk damarı yoluyla hidrodinamik HPV plazmid iletimi için, 10 mikrogram HPV plazmitini PBS'nin vücut kütlesinin% 8'ine eşdeğer olarak seyreltin. Plazmidi, fare başına 3 gauge yarım inçlik bir iğne ile donatılmış 26 mililitrelik bir şırıngaya yükleyin.
Kuyruk damarlarını genişletmek için HHD farelerini bir ısı lambası altında beş dakika ısıtın ve bir fareyi dikkatlice plastik bir süzgecin içine çekin. Kuyruğun orta üçte birlik kısmında genişlemiş bir yanal kuyruk damarı bulun ve tüm plazmit hacmini üç ila beş saniyelik bir süre boyunca kuyruk damarından geçirmek için iğneyi damara paralel olarak yerleştirin.
Viral antijene özgü iPSC'den türetilmiş CD8 pozitif T hücresi evlat edinici hücre transferi için, iPSC CD8 pozitif T hücrelerini gösterildiği gibi kültürün 22. gününde toplayın ve hücreleri yeni bir 10 santimetrelik hücre kültürü kabına tohumlayın.
Hücre kültürü inkübatöründe 30 dakika sonra, yüzen hücreleri 70 mikrometrelik bir naylon süzgeçten süzün ve canlı hücreleri sayın. Seyreltik, mililitre PBS konsantrasyonu başına 1.5 x 107 hücreye kadar satılır.
Az önce gösterildiği gibi, dört ila altı haftalık HHD farelerine 200 mikrolitre hücre enjekte edin. Hücre transferinden sonraki 14. günde, gösterildiği gibi bir hidrodinamik HPV plazmid uygulaması gerçekleştirin.