JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Immunology
0 görüntülenme • 2:25 dk. • July 8th, 2025
Mikroglia tek katmanları içeren çok kuyulu odacıklı bir slayt alın.
Test kuyusunda, hücreleri β-glukan ile kaplayın. Kontrol kuyusu β-glukandan yoksundur. Kuluçkaya yatmak.
Test kuyusunda, patojenle ilişkili moleküler modeller olan β-glukanlar, mikroglia üzerindeki spesifik reseptörlere bağlanarak β-glukan fagositozuna neden olur.
Bu, mikrogliayı aktive eder, reaktif oksidanlar ve sitokinler gibi biyoaktif molekülleri üretir ve ortama salır.
Kuyulardan biyoaktif moleküller içeren ortamı toplayın ve kalıntıları ve β-glukanı çıkarmak için süzün.
Biyoaktif moleküllerin biyolojik aktivitesini korumak için ortamı düşük sıcaklıklarda dondurun.
Daha sonra, ortamı çözün ve beyin kanseri hücrelerinin tek katmanlarını içeren çok kuyucuklu bir slayta ekleyin. Kuluçkaya yatmak.
Biyoaktif moleküller hücre sinyal yollarını tetikleyerek kanser hücresi proliferasyonunu azaltır ve apoptozu indükler.
Kanser hücresi proliferasyonunun azalması ve apoptozun artması, beyin kanseri hücrelerine karşı mikroglianın anti-tümöral özelliklerini destekleyen ajanlar olarak β-glukanları düşündürmektedir.
BV-2 mikroglial hücrelerini, P. ostreatus, P. djamor, G. lucidum ve H. erinaceus'tan izole edilen dört farklı beta-glukan mililitre başına 0.2 miligram konsantrasyonla 72 saat boyunca kaplayarak mikrogliayı aktive edin. 72 saat sonra, süpernatanı bir pipetle toplayın ve kalan hacmi 0.20 mikrometrelik bir şırınga filtresinden geçirin. Ardından, süpernatanı en az 24 saat boyunca -80 santigrat derecede dondurun. GL261'i önceden aktive edilmiş mikroglia şartlandırılmış ortamla tedavi etmek için, 72 saat boyunca% 80 birleşik GL261 hücrelerine 250 mikrolitre beta-glukan ile muamele edilmiş mikroglial ortam ekleyin.