JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Neuroscience
0 görüntülenme • 2:20 dk. • July 8th, 2025
Uygun bir farklılaşma ortamında hücre dışı matris kaplı bir lamel üzerinde kültürlenen sinir kök hücreleri ile başlayın.
UV radyasyonu ve yüklü parçacıklar dahil olmak üzere çeşitli reaktif bileşenler içeren bir madde hali olan soğuk plazma içeren bir şırınga alın.
Plazma şırıngasının memesini sinir hücresi kültürünün üzerinde belirli bir yüksekliğe yerleştirin.
Plazma jetini başlatın.
Plazma, sinir kök hücreleri ile etkileşime girerek onları aktive eder.
Eski kültür ortamını çıkarın. Taze bir kültür ortamı ekleyin ve inkübe edin.
Zamanla, aktive edilmiş sinir kök hücreleri çıkıntılar üretir.
Ortamı atın.
Ters faz kontrast ışık mikroskobu altında, bir sinir hücresinde bulunanlara benzeyen hücreler üzerinde uzun çıkıntıların varlığı, farklılaşmayı gösterir.
Nöral kök hücreleri plazma ile tedavi etmek için, şırınga memesi ile hücrelerin ilk oyuğu arasındaki mesafeyi 15 milimetreye ayarlayın. Nöral kök hücre kültürlerindeki süpernatanları 800 mikrolitre taze farklılaşma ortamı ile değiştirin ve plakayı plazma jetlerinin altına yerleştirin.
Şırınga nozulunun her bir kuyucuğun merkezine sabitlendiğinden emin olarak, tedavi başına 60 saniye boyunca plazma ile üç kuyu ve tedavi başına 60 saniye boyunca% 1 helyum ve oksijen gazı içeren üç kuyu oluşturun ve üç kuyuyu kontrol olarak tedavi edilmeden bırakın. Daha sonra, süpernatanları bir mililitre taze farklılaşma ortamı ile değiştirin ve hücreleri altı gün boyunca inkübatöre geri koyun. Ters faz kontrast ışık mikroskobu altında farklı grupların farklılaşma durumunu günlük olarak kontrol edin.
İşlemden sonra, süpernatanı taze farklılaşma ortamı ile değiştirmeden önce hücrelerin şartlandırılmış ortamda yaklaşık bir saat boyunca tamamen dengelenmesine izin verin.