JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Neuroscience
0 görüntülenme • 2:01 dk. • July 8th, 2025
Polimer kaplı bir petri kabı alın.
Oligodendrosit soyu veya OL hücrelerini uygun bir kültür ortamına ekleyin ve inkübe edin.
Polimer kaplama üzerindeki pozitif yük, negatif yüklü hücre zarını çekerek hücrenin tabağa bağlanmasını arttırır. Ortamdaki büyüme faktörleri ve besinler hücre genişlemesini kolaylaştırır.
Ortamı besin açısından fakir bir ortamla değiştirin ve inkübe edin.
Düşük besin seviyeleri, hücrelerde hafif strese neden olarak, hücre dışı boşluğa proteinleri, lipitleri ve büyüme faktörleri ve sitokinler dahil olmak üzere diğer molekülleri salgılamalarına neden olur.
Ortamı bir tüpte toplayın.
Filtre, hücresel kalıntıları ve çözünmeyen bileşenleri çıkarmak için ortamı sterilize eder.
OL hücreleri tarafından salgılanan çözünür biyoaktif molekülleri içeren süzüntü, oligodendrosit şartlandırılmış ortam veya OCM olarak adlandırılır.
Proteinlerin ve diğer moleküllerin bozulmasını önlemek için OCM'yi daha fazla kullanılana kadar daha düşük sıcaklıklarda saklayın, böylece OCM'nin etkinliğini koruyun.
10 mililitre hücre süspansiyonu ile önceden kaplanmış iki veya üç adet 100 milimetrelik Petri kabı yerleştirin.
Nemlendirilmiş bir inkübatörde 37 santigrat derecede% 5 karbondioksit altında inkübe edin.
Steril koşullar altında laminer akış başlığında, kültür ortamını 10 mililitre ılık Mbb 27 düşük ortam ile yenileyin.
Nemlendirilmiş bir inkübatörde 37 santigrat derecede% 5 karbondioksit altında 2 gün inkübe edin.
OCM'yi hasat etmek için, oligodendrosit tarafından salgılanan faktörleri içeren süpernatanı toplayın. OCM'yi 0,22 mikronluk bir filtre kullanarak filtreyle sterilize edin.