JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Neuroscience
0 görüntülenme • 2:08 dk. • July 8th, 2025
Bir kültür plakasında, pozitif yüklü bir polimer olan poliornitin ile bir lamel kaplayın ve inkübe edin.
Poliornitin, negatif yüklü hücrelerin lamele yapışmasına yardımcı olan ağ benzeri bir tabaka oluşturur.
Solüsyonu çıkarın ve bağlanmamış poliornitini çıkarmak için lamelleri tamponlu bir tuz solüsyonu ile yıkayın.
Laminin adı verilen hücre dışı bir matris proteini içeren bir çözelti ekleyin ve inkübe edin.
Laminin, poliornitin kaplı lamel üzerinde bir matris oluşturarak hücre bağlanmasını arttırır.
Solüsyonu atın ve büyüme faktörü içermeyen bir ortamda asılı kalan az sayıda nöral kök hücre alın.
Hücreleri eşit şekilde dağıtmak için bu düşük yoğunluklu kültürü hazırlanan lamel üzerine yavaş dönen bir hareketle ekleyin.
Başlangıçta, büyüme faktörü yoksunluğu hücre bölünmesini teşvik eder.
Zamanla, kök hücreler uzun projeksiyonlarla nöronlara farklılaşır
Sonunda, nöronlar, kortikal piramidal nöronlar gibi, projeksiyonları üzerinde omurga benzeri yapılar üretir.
Nöronal kültürleri hazırlamak için, cam lamelleri altı oyuklu kültür kaplarına yerleştirin ve poliornitin ekleyin. Bir akış başlığı altında gece boyunca inkübe edin. Ertesi gün, lamelleri üç kez yıkamak için DPBS'yi kullanın ve laminin ekleyin. Bir akış başlığı altında en az 10 saat inkübe edin.
Aşağıdaki bileşenleri içeren kültür ortamını hazırlayın. Ardından, hücre kümelenmesini azaltmak için yavaş dönen hareketlerle pipetleyerek, santimetre kare başına 50.000 hücre yoğunluğunda nöral kök hücreleri veya NSC'leri plakalamak ve göndermek için ortamı kullanın.