Yatay Fare Hipokampal Beyin Dilimlerinin Elde Edilmesi

Fare beyin yarım kürelerini yüksek sükroz çözeltisi içinde alın. Yarım küreleri, ventral tarafları yukarı bakacak şekilde bir yapıştırıcı kullanarak bir vibratom numune plakasına sabitleyin.

Numune plakasını dilimleme odasına aktarın.

Dokunun fizyolojik koşullarını korumak ve yapıştırıcıyı katılaştırmak için yarı donmuş yüksek sükroz çözeltisi ekleyin.

Doku oksijenlenmesini sürdürmek için bir karbondioksit-oksijen karışımı sağlayın.

Ayarlanan parametreleri kullanarak, ilk dilimleri elde edin ve çıkarın. Ayrıca, yatay hipokampal dilimler elde edin.

Bu beyin dilimlerini doku iyileşmesi için ACSF içeren bir odaya dikkatlice aktarın.

Yatay hipokampal dilimler daha fazla deney için hazırdır.

Her iki yarım küreyi de beynin ventral kısmı yukarı bakacak şekilde yeni kesilmiş sırt tarafına yerleştirin ve bir numune plakasına bir damla süper yapıştırıcı yerleştirin. Her iki doku parçasını da yerleştirmek için yapıştırıcıyı geniş bir alana yaymak için bir pipet ucu kullanın ve bir yarım kürenin ventral tarafına bir parça filtre kağıdı kayışına dokunun. Beynin sırt tarafını dikkatlice yarı kurutmak için başka bir filtre kağıdı kayışı kullanın ve yarım küre sırt tarafını numune plakası üzerindeki yapıştırıcının üzerine yerleştirin.

İkinci yarım küreyi az önce gösterildiği gibi yapıştırıcı üzerine yerleştirmek için iki ek filtre kağıdı kayışı kullanın ve numune plakasını dilimleme odasına yerleştirin. Ardından, hızlı ama dikkatli bir şekilde, plakayı buz gibi soğuk yüksek sükroz dilim çözeltisi sulu karı ile kaplayın. Beyin dokusunun bölümlerini elde etmek için, vibratom bıçağını hemisferlerin medial tarafının önüne yerleştirin ve vibratom masasını, bıçak hemisferlerin ventral tarafları ile aynı yükseklikte olacak şekilde kaldırın.

Bıçağı sırt yönünde 600 mikron daha alçaltmak için vibratom kontrolünü kullanın ve ilk iki dilim iki yarım küreden tamamen ayrılana kadar dokuyu dilimleyin. İlk iki doku dilimi elde edildiğinde, kesme yönünü tersine çevirin ve tekrar dilimlemeden önce bıçağı 300 mikron daha indirin. Hipokampus görünür hale geldiğinde, dilimleri toplamak ve su banyosundaki geri kazanım odasına aktarmak için genişletilmiş bir plastik Pasteur pipeti kullanın.