JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Neuroscience
0 görüntülenme • 2:29 dk. • August 7th, 2025
Oklüzyonu indüklemek için orta serebral arterine yerleştirilmiş bir monofilament ile anestezi uygulanmış bir fareyi ele alalım.
Bu, beyne giden kan akışını engelleyerek fokal iskemiyi tetikler.
Oklüzyon, oksijen ve glikoz kaynağını kısıtlayarak ATP tükenmesine ve nöronal depolarizasyona neden olur.
Depolarize nöronlar, postsinaptik reseptörlere bağlanan ve büyük bir kalsiyum akışına neden olan aşırı glutamat salgılar.
Yüksek hücre içi kalsiyum, mitokondriyal fonksiyonu bozar ve ROS üretimini teşvik ederek nöronal hasarı başlatır.
Fareyi yeniden uyuşturun.
İnsizyonu tekrar açın ve reperfüzyon elde etmek için monofilamenti çıkarın.
Ani oksijen geri girişi, işlevsiz mitokondriden aşırı ROS oluşturur ve nöronal hasarı kötüleştirir.
Bunu hafifletmek için, fareyi asidik son koşullandırma için yüksek karbondioksitli bir gaz karışımına veya reperfüzyon başladıktan sonra APC'ye maruz bırakın.
Bu, beyindeki proton konsantrasyonunu arttırır, reseptörleri inhibe eder, kalsiyum akışını azaltır ve kalsiyum aracılı eksitotoksisiteyi önler.
Ek olarak, APC mitokondriyi stabilize eder ve ROS üretimini inhibe eder, böylece nöroproteksiyon sağlar.
Oklüzyonun başlamasından 55 dakika sonra, hayvanı izofluran ile tekrar uyuşturun ve hayvanı daha önce olduğu gibi konumlandırın. Ardından boyun kesisini açın ve ortak karotis arteri yeniden ortaya çıkarın. Oklüzyon döneminden sonra, reperfüzyon elde etmek için filamenti nazikçe çıkarmak için oftalmik forseps kullanın. Daha sonra düğümü sıkarak geçici dikişi kalıcı hale getirin. Asidoz tedavisi için burun konisi tarafından solunan gazı beş dakika boyunca %20 karbondioksit, %20 oksijen ve %60 nitrojen olarak değiştirin. Kesi kesintili bir cerrahi dikişle kapatıldıktan sonra, fare bilincini geri kazanana kadar fareyi 30 santigrat derece ısıtılmış bir kafese yerleştirin.