Name: Farelerde İçSel Kardiyak Pacemaking Kusurlarını Belirlemek için Sinoatrial Düğüm Ateşleme Hızının Mikroelekrod Dizisi Kaydı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-07-05T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 20 s
Description: Öğrenin farelerde sinoatrial düğüm mikroelektrod dizisi kaydı ile içsel kardiyak ateşleme hızını ölçme yöntemini. Bu teknik, pacemaking kusurlarını belirlemeye ve farmakolojik ajanların etkilerini incelemeye olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüleri, R01NS100954 ve R01NS099188 hibe numaraları tarafından finanse edildi.

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Doku kırılgan olduğundan ve başarılı bir kayıt için sağlıklı doku gerektiğinden, SAN diseksiyon sürecini uygulamak ve mastering yapmak zorunludur. SAN diseksiyonu sırasında, dokunun uygun bölgesini elde etmek için doğru yönlendirme esastır. Bununla birlikte, diseksiyon işlemi sırasında kalbin orijinal yönelimi kolayca kaybolabilir, bu da bu çabayı zorlaştırır. Bu nedenle, doğru sol-sağ yönlendirmesini sağlamak için, atria görsel olarak denetlenmelidir. Tipik olarak, sağ atriyum daha şeffaf olma eğilimindedir, sol atriyum...

Kalp, beyinden kaynaklananlar gibi hem kardiyak hem de dışsal etkiler tarafından yönetilen karmaşık bir organdır. Sinoatrial düğüm (SAN), kalp pili hücrelerini (sinoatrial hücreler veya SA hücreleri olarak da adlandırılır) memeli kalp atışının başlatılmasından ve sürekliliğinden sorumlu olan kalp pili hücrelerini barındıran tanımlanmış bir bölgedir1,2. İç kalp atış hızı, kalp pili hücrelerinin diğer kardiyak veya nöro-humoral etkilerden etkilenmeden yönlendirdiği hızdır, ancak insanlarda ve elektrokardiyogramlar gibi canlı hayvanlarda geleneksel kalp atış hızı önlemleri kalp üzerindeki hem kalp pilini hem de sinirsel etkileri yansıtır. SA hücreleri üzerindeki en dikkat çekici sinirsel etki, vücudun fizyolojik gereksinimlerini karşılamak için ateşleme kalıplarını sürekli olarak modüle eden otonom sinir sisteminden3. Bu fikri destekleyen, hem sempatik hem de parasempatik projeksiyonlar SAN4yakınında bulunabilir. İntrinsic kardiyak sinir sistemi (ICNS), ganglionlu pleksilerin, özellikle sağ atriada, SAN5,6aktivitesini içselleştirdikleri ve düzenledikleri bir başka önemli sinirsel etkidir.
Kalp pilimleme açıklarını anlamak klinik olarak önemlidir, çünkü işlev bozukluğu birçok kardiyak bozukluğun altında yatan ve diğer komplikasyonların riskine katkıda bulunabilir. Hasta sinüs sendromu (SSS), uygun tempo yapımını engelleyen sinoatriyal düğümün işlev bozukluğu ile karakterize bir hastalık kategorisidir7,8. SSS sinüs bradikardi, sinüs duraklamaları, sinüs arrest, sinoatrial çıkış bloğu ve alternatif bradyarrythmias ve tachyarrhythmias9 ile sunulabilir ve artan embolik inme riski ve ani ölüm8,10gibi komplikasyonlara yol açabilir. Ani kardiyak ölüm riski artan ve ventriküler fibrilasyon ile işaretlenmiş bir kardiyak bozukluk olan Brugada sendromu olanlar, komorbid SAN disfonksiyonu varsa aritmojenik olaylar için daha fazla risk altındadır11,12. Sinoatriyal disfonksiyonun kalbin ötesinde fizyolojik sonuçları da olabilir. Örneğin, SSS'nin serebral hipoperfüzyon nedeniyle bir hastada nöbetleri tetiklediği gözlenmiştir13.
Sinoatriyal tempo yapma açıklarını tanımlamak için, otonom sinir sisteminin veya humoral faktörlerin etkisi olmadan SAN'ın aktivitesi ölçülerek içsel kalp atış hızlarının belirlenmesi gerekir. Klinik olarak, bu farmakolojik otonomik blokaj14ile yaklaşık olarak kullanılabilir, ancak aynı teknik memeli modellerinde içsel kardiyak fonksiyon15,16' yı incelemek için de uygulanabilir. Bu yaklaşım, katkıda bulunan sinirsel etkilerin büyük bir kısmını bloke ederken ve in vivo kardiyak muayeneye izin verirken, kalp üzerindeki tüm dışsal etkileri tamamen ortadan kaldırmaz. Hayvan modellerinde içsel kardiyak fonksiyonu incelemek için kullanılan bir başka araştırma tekniği, tipik olarak elektrogramlar, volta veya epikardiyal multielekrod dizileri17 , 18 , 19,20kullanılarak ölçümler içeren Langendorff perfüzyonlu kalpler kullanılarak izole edilmiş kalp kayıtlarıdır. Bu teknik kalbi vücuttan çıkarmayı içerdiğinden kardiyak fonksiyona daha spesifik olsa da, ölçümler hala içsel kalp atış hızı ölçümlerini etkileyebilecek mekano-elektrikli otoregülatör mekanizmalardan etkilenebilir21. İzole kalp kayıtları da ICNS 5,6,22,23aracılığıyla otonom düzenlemeden etkilenebilir. Ayrıca, kalp fonksiyon ölçümleri için kritik olan kalbin fizyolojik olarak ilgili bir sıcaklığını korumak, izole kalp yaklaşımlarında zor olabilir20. SAN fonksiyonunu incelemek için daha doğrudan bir yöntem, SAN dokusunu özellikle izole etmek ve aktivitesini ölçmektir. Bu, SAN şeritleri (izole SAN dokusu) veya izole SAN kalp pili hücreleri24,25aracılığıyla gerçekleştirilebilir. SAN çok küçük ve yüksek tanımlı bir bölge olduğu için her ikisi de yüksek derecede teknik eğitim gerektirir ve doğru yapılmazsa ayrışma hücrenin genel sağlığına zarar verebileceğinden hücre izolasyonu daha da büyük bir zorluk oluşturur. Ayrıca, bu teknikler bireysel kayıt mikroelektrodlarını kullanarak dokudan veya hücrelerden başarılı bir şekilde kayıt yapmak için uzman elektrofizyolojik beceriler gerektirir.
Bu protokolde, içsel kalp atış hızı ölçümleri elde etmek için bir mikroelektod dizisi (MEA) kullanarak SAN in vitrosunu kaydetme tekniğini açıklıyoruz. Bu yaklaşım, yoğun elektrofizyolojik becerilerden yoksun araştırmacılar için son derece spesifik elektrofizyolojik kayıtları erişilebilir hale getirme avantajına sahiptir. MEA'lar daha önce birincil kardiyomiyosit kültürlerinde kardiyomiyosit fonksiyonunu incelemek için kullanılmıştır26,27,28,29,30,31,32, kalp tabakaları33,34,35,36,37,38,39ve doku bütün binekler40, 41,42,43,44,45,46,47. SAN dokusu41,42'dekialan potansiyellerini incelemek için daha önce de çalışma yapılmıştır. Burada, murine içSEL SAN atış hızlarını kaydetmek ve analiz etmek için MEA'yı kullanmak için bir metodoloji sunuyoruz. Ayrıca, voltaj kapılı bir K+ kanal engelleyici olan 4-aminopyridinin (4-AP) etkilerini gösteren bir örnek deney sağlayarak ilaçların SAN iç ateşleme oranları üzerindeki farmakolojik etkilerini test etmek için bu tekniğin nasıl kullanılabileceğini açıklıyoruz. Tanımlanmış anatomik yer işaretlerini kullanarak, diğer yöntemlerde gerekli olan geniş doku diseksiyonlarını veya hücre izolasyonlarını yapmak zorunda kalmadan SAN'ı doğru bir şekilde kaydedebiliriz. MEA maliyet-yasaklayıcı olsa da, kayıtlar çok çeşitli klinik ve fizyolojik araştırma uygulamalarında kullanılabilecek son derece spesifik ve güvenilir pacemaking önlemleri sağlar.

<table><tbody><tr><td>4-Aminopiridin</td><td>Sigma</td><td>A78403-25G</td><td></td></tr><tr><td>22 gauge şırınga iğnesi</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-826-5A</td><td>Diseksiyon için kullanılır</td></tr><tr><td>23 gauge şırınga iğnesi</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-826-6C</td><td>Diseksiyon için kullanılır</td></tr><tr><td>60mm Petri Kapları</td><td>Genesee Scientific</td><td>32-105G</td><td></td></tr><tr><td>500mL Pyrex Şişe</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-414-1C</td><td>Çözeltileri depolamak için kullanılır</td></tr><tr><td>1000 mL Pyrex Şişe</td><td>Fisher Scientific</td><td>06-414-1D</td><td>Çözeltileri depolamak için kullanılır</td></tr><tr><td>Kemik Forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>16060-11</td><td></td></tr><tr><td>Kalsiyum klorür dihidrat (CaCl2&middot; 2H < alt > 2 < / alt >)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>C5080-500G</td><td></td></tr><tr><td>Karbojen (% 95 O< alt >2 < / alt >,% 5 CO< alt > 2 < / alt >)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Castroviejo Makas, 4 "</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>15024-10</td><td></td></tr><tr><td>D - (+) - Glikoz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7021-1KG</td><td></td></tr><tr><td>Veri Toplama Bilgisayarı</td><td></td><td></td><td>CPU: Intel Xeon veya Intel Core i7, Bellek: 8GB, HDD: 1TB, Grafik Kartı: NVIDIA veya Yerleşik, Ekran: 1920x1080</td></tr><tr><td>Diseksiyon Mikroskobu</td><td>Jenco</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon Pimleri</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>26002-20</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #2 Laminektomi Forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11223-20</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #55 Forseps</td><td>Güzel Bilimler Araçları</td><td>11295-51</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; Ekstra İnce Graefe Forseps</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>11152-10</td><td></td></tr><tr><td>Cam Hazneli</td><td>Grainger</td><td>49WF30</td><td>Fare ötenazi için kullanılır</td></tr><tr><td>Arp Ankraj</td><td>Kiti Warner Instruments</td><td>&nbsp; SHD-22CL / 15 WI 64-0247</td><td></td></tr><tr><td>HCl</td><td>Fisher Chemicals</td><td>SA48-4</td><td>pH dengeleme için kullanılır</td></tr><tr><td>Hemostat</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>13013-14</td><td></td></tr><tr><td>Heparin</td><td>Aurobindo Pharma Limited IDA, Pashamylaram</td><td>NDC 63739-953-25</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3375-250G</td><td></td></tr><tr><td>Ters Mikroskop</td><td>Motic</td><td>AE2000</td><td></td></tr><tr><td>İzofluran</td><td>Patterson Veteriner</td><td>07-893-1389</td><td></td></tr><tr><td>Laboratuvar Bandı</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-950</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon Mikroskobu için Işık</td><td>Dolan-Jenner</td><td>MI150DG 660000391014</td><td></td></tr><tr><td>Magnezyum klorür (MgCl2)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>208337-100G</td><td></td></tr><tr><td>MED64 Kafa Amplifikatörü</td><td>MED64</td><td>MED-A64HE1S</td><td></td></tr><tr><td>MED64 Ana Amplifikatör</td><td>MED64</td><td>MED-A64MD1A</td><td></td></tr><tr><td>MED64 Perfüzyon Kapağı</td><td>MED64</td><td>MED-KCAP01</td><td></td></tr><tr><td>MED64 Perfüzyon Boru Tutucu Kiti</td><td>MED64</td><td>MED-KPK02</td><td></td></tr><tr><td>MED64 ThermoConnector</td><td>MED64</td><td>MED-CP04</td><td></td></tr><tr><td>Mesh</td><td>&nbsp; Warner Instruments</td><td>640246</td><td></td></tr><tr><td>Mikroelektrot dizisi (MEA)</td><td>Alpha Med Scientific</td><td>MED-R515A</td><td></td></tr><tr><td>Mobius Yazılımı</td><td>WitWerx Inc.</td><td></td><td>MED64</td></tr><tr><td>NaOH</td> için özel yazılım <td>Fisher Chemicals</td><td>S320-500</td><td>pH dengeleme için kullanılır</td></tr><tr><td>Normal Salin</td><td>Ultigiene</td><td>NDC 50989-885-17</td><td></td></tr><tr><td>Boya Fırçası</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC1751733</td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Genesee Scientific</td><td>PM-996</td><td></td></tr><tr><td>Peristaltik Pompa</td><td>Gilson</td><td>F155009</td><td></td></tr><tr><td>Peristaltik Pompa Borusu</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-171-298</td><td>1/8 '' İç Çap</td></tr><tr><td>Polietilenimin</td><td>Sigma</td><td>P3143</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum klorür (KCl)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>P9333-500G</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum fosfat monobazik (KH2PO 4)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>P5655-500G</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Bikarbonat</td><td>Sigma</td><td>S6297</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum klorür (NaCl)</td> <td>Fisher Scientific</td><td>S671-3</td><td></td></tr><tr><td>Sylgruard Elastomer Kiti</td><td>Dow Corning</td><td>184 SIL ELAST KITI 0.5KG</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Fosfat Monobazik</td><td>Sigma</td><td>S6566</td><td></td></tr><tr><td>Sodyum tetraborat</td><td>Sigma</td><td>S9640</td><td></td></tr><tr><td>Cerrahi Makas</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>14074-09</td><td></td></tr><tr><td>Transfer Pipetleri (3 mL dereceli)</td><td>Samco Scientific</td><td>225</td><td></td></tr></tbody></table>

farelerde İçsel kardiyak pacemaking kusurlarını belirlemek için sinoatrial düğüm ateşleme hızının mikroelekrod dizisi kaydı

Microelectrode Array Recording of Sinoatrial Node Firing Rate to Identify Intrinsic Cardiac Pacemaking Defects in Mice

Sağ kulakçıkta bulunan sinoatriyal düğüm (SAN), kalbin kalp pili hücrelerini içerir ve bu bölgenin işlev bozukluğu taşikardi veya bradikardiye neden olabilir. Kardiyak tempo oluşturma kusurlarının güvenilir bir şekilde tanımlanması, oran açıklarını maskeleyebilen otonom sinir sisteminin etkisini büyük ölçüde önleyerek iç kalp atışlarının ölçülmesini gerektirir. İntrinsic kardiyak kalp pili fonksiyonunu analiz etmek için geleneksel yöntemler, in vivo kalp atış hızlarını ölçmek için ilaç kaynaklı otonomik blokajı, içsel kalp atışlarını ölçmek için izole kalp kayıtlarını ve sponyatrial kalp pili hücrelerinin sinoatrial şeridini veya tek hücreli patch-clamp kayıtlarını spontan eylem potansiyel ateşleme hızlarını ölçmek için içerir. Ancak, bu daha geleneksel teknikler teknik olarak zor ve gerçekleştirilmesi zor olabilir. Burada, farelerden tüm montajlı sinoatriyal düğüm preparatlarının mikroelekrod dizisi (MEA) kayıtlarını gerçekleştirerek içsel kardiyak ateşleme hızını ölçmek için yeni bir metodoloji sunuyoruz. MEA'lar, in vitro hücre dışı alan potansiyellerini kaydetmek için ızgara benzeri bir desende düzenlenmiş birden fazla mikroelekroddan oluşur. Burada açıklanan yöntem, içsel kalp atış hızlarını kaydetmek için önceki yaklaşımlardan nispeten daha hızlı, daha basit ve daha kesin olmanın ve aynı zamanda kolay farmakolojik sorgulamaya izin vermenin birleşik avantajına sahiptir.

Dokunun 15 dakika boyunca çanağa alışmasına izin verdikten sonra, 10 bir dakikalık izler kaydedilir. Şu anki protokolümüz bir saatten fazla bir süredir aktivite kaydediyor, ancak burada gösterilmeyen yayınlanmamış verilerde ≥4 saat boyunca kararlı atış düzenleri kaydettik. Deneysel bir hazırlık veri toplama için iyiyse, her kayıt kanalı belirli bir kanal için tekdüze şekilde tutarlı ve eşit aralıklı yinelenen dalga formları (yani sivri) sergilemelidir (Şekil 11D). Bu dalga şekilleri, içsel k...

Bu protokol, farelerdeki hız yapma kusurlarını tanımlamak için tüm sinoatriyal düğüm dokusunun mikroelekrod dizi kaydını kullanarak içsel kardiyak ateşleme hızını ölçmek için yeni bir metodoloji tanımlamayı amaçlamaktadır. Farmakolojik ajanlar, içsel tempo yapımı üzerindeki etkilerini incelemek için bu yöntemde de tanıtılabilir.

Farelerde İçSel Kardiyak Pacemaking Kusurlarını Belirlemek için Sinoatrial Düğüm Ateşleme Hızının Mikroelekrod Dizisi Kaydı

The sinoatrial node (SAN), located in the right atrium, contains the pacemaker cells of the heart, and dysfunction of this region can cause tachycardia or ...

İç kalp atış hızının ölçülmesi kalp sağlığının önemli bir göstergesidir. Bu teknik, sinoatriyal düğüm üzerindeki şaşırtıcı etkilerin çoğunu hariç tutarken bu oranı doğru bir şekilde ölçmektedir. mea iç kalp atış hızı kaydı, kapsamlı elektrofizyoloji eğitimi olmadan tek hücreli kayıtlara benzer doğru atış hızı verilerini yakalar.Bu tekniği kullanan bireyler erken deneylerde sağlıklı doku preparatları elde etmekte zorlanabilirler, bu nedenle diseksiyonu uygulayın ve gerçek veri toplamaya başlamadan önce tamponları ve veri toplama ayarlarını optimize edin. Prosedürü gösteren doktorlar Man Si ve Praveen Kumar, laboratuvarımdaki doktora sonrası araştırmacılar. Ötenazili farenin derisini bir hemostatla tutarak başlayın ve sol costal kemerden sağ costal kemere kadar göğüs kafesinin hemen altındaki deride enine bir kesi yapmak için cerrahi makas kullanın.Peritonun açılmasını kesmek için cerrahi makas kullanın ve aşırı kanamayı önlemek için karaciğeri kesmeden karaciğeri diyaframdan dikkatlice ayırın. Torasik boşluğu açığa çıkarmak için toraks boyunca diyaframı inkübe edin. Kalbi ortaya çıkarmak için göğüs kafesinin yanal duvarlarını costal kemerlerin kenarlarından köprücük kemiğine kadar kesmek için cerrahi makası kullanın, ardından kaburgayı omuza sabitlemek için 23 kalibrelik bir şırınga iğnesi kullanın.Nemli tutmak için sıcak heparinize komple Tyrode çözeltisini kalbe bırakmak için bir transfer pipeti kullanın. Akciğerleri ekstra ince Graefe tokmaklarıyla tutun ve akciğerleri çıkarmak için ameliyat makasıyla nefes borusunun kesilmesi. Kalbi çıkarmak için, ekstra ince Graefe forseps ile kalbin tepesini tutun ve cerrahi makasla aort ve alt vena kavayı kesin.Kalbi kürlenmiş silikon elastomer içeren bir Petri kabına aktarın ve kalbi iki ila üç mililitre sıcak heparinize komple Tyrode çözeltisi ile yıkamak için bir transfer pipet kullanın. Kalbin tepesini bir diseksiyon pimi ile yemeğe takın. Alt vena kavayı Dumont 2 laminektomi asası ile tutun.Sinoatriyal düğümün yaklaşık konumunu da tanımlayan sağ atriyumdaki konumlarını bulmak için alt ve üstün vena kava içinden 22 kalibrelik bir şırınga iğnesi yerleştirin. Dumont 2 laminektomi tokadı ile doğru atriyal apandisiti tutun ve yerinde tutmak için sağ atriyal ekten bir diseksiyon iğnesi koyun. Sol atriyal ek için aynı prosedürü tekrarlayın, ardından vena cavae'yi kapsayan şırınga iğnesini çıkarın.Castroviejo makasını kullanarak kalpten kanı serbest bırakmak için ventriküller boyunca enine bir kesi yaparak kalbin tepesini çıkarın, ardından sıcak heparinize komple Tyrode çözeltisi ekleyerek kalbi yıkayın. Attriyot ventriküllerden ayrılana kadar atriyoventriküler septum boyunca kesmek ve kesiyi ventriküle daha yakın tutmak için Castroviejo makasını kullanın. Sol kulakçık çıkarmak için interarterial septum boyunca kesin.Diseksiyon pimlerini düz hale getirmek için sağ atriyumun çevresine yerleştirin. Castroviejo makasını kullanarak atriyumdan kalan yağları, damarları veya dokuları çıkarın ve sağ atriyumdaki sinoatriyal düğümü bulun. Giriş çözümü modeline Tyrode'un çözümünü ekleyin ve Tırrode'un çözeltisini oksijene almak için karbojen gazı akışını açın.Peristaltik pompayı dakikada iki mililitre akış hızı veren 25 RPM'ye ayarlayın. Pompayı çalıştırdıktan sonra, tamponun sistemden sızmadığından emin olun ve sıcaklık kontrol cihazını 37 santigrat dereceye ayarlayın. Diseksiyonlu dokuyu diseksiyon Petri kabından mikroelektod dizi ızgarasına aktarmak için Dumont 55 tokadını kullanın.Elektrot ızgarasının sinoatrial düğüm bölgesini kaplamak için dokuyu yumuşak bir boya fırçasıyla hafifçe yerleştirin. Daha sonra kemik kümeslerini veya kavisli kümesleri kullanarak ağı dokunun üzerine yerleştirin. Kemik tokalarını kullanarak, her şeyi yerinde tutmak için arp çapasını ağ üzerine yerleştirin.Mikroelekrod dizi çanağını konnektör plakasına yerleştirin. Perfüzyon kapağını arp dilimi ankrajını bozmadan mikroelektoz dizi kabına dikkatlice yerleştirin ve perfüzyon boşluğunun bantla sabitlensin. Amplifikatörü açın ve yazılımdaki kayıt için bir iş akışı ayarlayın.beat_recording'ı seçin. moflo şablonu. Açın ve istenen kayıt koşullarına göre izleme sayısını, izleme süresini, izleme aralığını, giriş voltajını, örnekleme hızını ve diğer kayıt parametrelerini ayarlayın.Kaydı başlatmak ve izlemeler arasında iki dakikalık aralıklarla bir dakikalık sürenin 10 izlemesi için veri almak için kaydet ve oynat düğmesini tıklatın. Pompayı duraklatın ve pompa giriş borularını normal kayıt çözümünden Tyrode'un istenen ilacı içeren çözeltisine geçirin. Pompayı yeniden başlatın ve kayda devam edin.İlaçla aşılanan Tyrode'un çözeltisi dokuya ulaştıktan sonra, temel kayıtlar için daha önce olduğu gibi 10 iz kaydedin. Mikroelekrod dizisindeki dokunun konumunun son bir resmini çekin. Kaydedilen kayıtlı veri dosyasını analiz yazılımının beat frekans analizi şablonunda açın.Oynat'a tıklayın ve tüm kaydın veri görselleştirme için çalışmasına izin verin ve ardından uygun analiz parametreleri atayın. Analize dahil edilecek kanalları seçin ve otomatik dalga biçimi tepe tanımlaması için istenen genlik maxima veya genlik minima eşik değerlerini ayarlayın. Veri kümesini yeniden yürütmek ve analiz parametrelerinin bir ani ayıklama için uygun olduğunu onaylamak için oynat simgesine tekrar tıklayın.Analiz için, deneyin temel döneminde çoğu kanalda her iz için kararlı bir dayak oranı gösteren en kararlı üç ardışık izi ve uyuşturucuya maruz kalma süresi boyunca ardışık üç kararlı iz tanımlayın. Analizi başlatmak için oynat ve kaydet simgesini tıklatın. Veriler, sinoatriyal düğüm atım frekans ölçümü için 45 günlük erkek vahşi tip siyah İsviçre faresinden toplandı.Farklı şekil ve genliklere sahip dalga formları farklı kanallarda gözlendi ve tüm kanallarda aynı ara aralıklar ve ateşleme frekansları görüldü. Bununla birlikte, elektrotla doku temasının derecesi genlik gibi dalga biçimi özelliklerini de etkileyebilir. Kaydedilen 10 izden, daha fazla analiz için kararlı vuruş frekansı ve aralama aralığına sahip ardışık üç kanal seçildi.Kötü ayıklanmış başak desenleri bulunmamalıdır, ancak varsa gürültüden etkilenir veya kararsızdır. Bireysel kalp atışlarına karşılık gelen dalga şekilleri içsel kardiyak tempo yapma aktivitesini yansıtır. Mikroelektod dizi sistemi, farmakolojik etkileri analiz etmek için ilaç ajanlarının kolay uygulanmasını sağlar.Örnekleme verilerinde, seçilen üç iz arasında 64 kanalın tamamında iç atış hızı dakikada yaklaşık 320 atım olarak bulunmuştur. 4-aminopyrimidine'in tanıtılması, beklendiği gibi ara aralıkları artırdı ve bu da vuruş sıklığını dakikada 320'den 210 atıma düşürtü. Analiz için güvenilir veri toplamak için, izlerin stabil olduğunu ve standart kriterleri karşıladığını doğrulayarak kayıt sırasında dokunun sağlıklı olduğunu doğrulamak önemlidir.MEA'lar kalbin diğer bölgelerindeki kardiyak aktiviteyi kaydetmek için kullanılabilir ve genetik ve farmakolojik manipülasyonun etkilerini incelemek için uygun olan bölgeye özgü ayrıntılı karakterizasyona izin verir.

microelectrode-array-recording-sinoatrial-node-firing-rate-to

Research

JoVE Journal

Medicine

Programlı elektrik stimülasyonu, kalp iletim özellikleri belirlemek için yeteneği ve çeşitli pacemaker protokolleri kullanarak kardiyak aritmiler neden ve sona erdirme imkanı sağlar. Transvenöz bir kateter yardımıyla, intrakardiyak elektrogram kayıtları, programlı elektrik stimülasyonu protokolleri aritmojenik substratlar tanımlamak için aşağıdaki farelerde elde edilebilir.

Farelerde Programlı Elektrik Stimülasyon

Telemetrik EKG, kardiyak aritmiler ve ani kardiyak ölüm için hayvan modellerinde değerlendirilmesinde önemli bir araç olarak ortaya çıkmıştır. Burada, fareler üzerinde yapılan uzun vadeli ambulatuvar EKG monitorizasyonu uygulama için telemetrik EKG kayıtları kademeli bir kılavuz mevcut.

Farelerde ambulatuvar EKG Kaydı

Bu video, sinoatriyal düğümü veya SAN'ı fare kalbinden izole etme prosedürünü gösterir. SAN, spontan aksiyon potansiyelleri üreterek kalp atışını başlatan sinoatriyal hücreleri barındırır.

Fare Modelinden Sinoatriyal Düğüm İzolasyonu: Murin Kalbinden SA Düğümünü Hasat Etme Prosedürü

Yöntemler yama kelepçe elektrofizyoloji veya görüntüleme çalışmaları için yetişkin farelerin sinoatriyal düğüm miyosit (SAMs) izolasyonu için gösterilmiştir. İzole edilmiş hücreler, doğrudan kullanılabilir ya da bu tür genetik olarak kodlanmış muhabir olarak ilgi proteinlerin ekspresyonuna izin vermek için kültür içinde muhafaza edilebilir.

Yetişkin fareler ile Sinoatriyal Düğüm miyositlerin İzolasyonu, Kültür ve Fonksiyonel Karakterizasyonu Yöntemleri

Burada, bir yüksek uzaysal ve zamansal çözünürlükte, farenin sağ atrium ve özellikle Çin-atriyal düğümden elektriksel aktivitenin optik haritalama için bir protokol mevcut.

Fare Çin-atriyal düğüm yüksek çözünürlüklü optik Haritalama

Burada, yetişkin farelerden canlı ventriküler dilimlerin hazırlanmasını ve keskin elektrodun hareket potansiyel kayıtları için kullanımlarını açıklıyoruz. Bu çok hücreli müstahzarlar , in vitro olarak elektrofizyolojik ve farmakolojik çalışmalar için değerli bir model oluşturan, korunmuş bir in vivo doku yapısı sağlar.

Elektrofizyolojik Çalışmalar İçin Murin Kısa Eksenli Ventriküler Kalp Dilimleri

Bu iletişim kuralı ile yüksek zamansal ve mekansal çözünürlüklü, membran gerilim çift kayıtları da dahil olmak üzere bir optik haritalama sistemi kullanan fare Kulakçık Elektrofizyolojik değerlendirme açıklar ve Ca2 + geçici altında programlanmış stimülasyon özel elektrot kateter aracılığıyla.

Yüksek çözünürlüklü optik eşleştirmenin fare Atria Elektrofizyolojik değerlendirme

Burada, bir iletişim kuralı modülasyonu intrakardiyak otonom sinir sistemi ve temel Elektrofizyoloji, arrhythmogenesis ve ex vivo Langendorff kurulumu kullanarak kamp dinamikleri üzerindeki etkisi değerlendirilmesi için mevcut.

Kardiyak Elektrofizyoloji ve Arrhythmogenesis bir Ex Vivo Langendorff sisteminde intrakardiyak nöronların etkisi

Küçük farelerde teknik olarak kolay, ucuz, hızlı ve uygun fiyatlı ve gelişmiş hassasiyetle yapılabilen bir EKG protokolü salıyoruz. Bu yöntemi farelerde farmakolojik ajanlar, genetik modifikasyonlar ve hastalık modellerini incelemek için bir tarama yaklaşımı olarak öneriyoruz.

Kurşun II kullanarak Anestezili Farelerde Elektrokardiyogram Kayıtları

Burada, temel EKG parametreleri ve yaygın aritmiler için murin uzun süreli elektrokardiyografi (EKG) verilerini analiz etmek için yarı otomatik bir yaklaşım için adım adım bir protokol sunuyoruz. Veriler, canlı ve uyanık farelerde implante edilebilir telemetri vericileri tarafından elde edilir ve Ponemah ve analiz modülleri kullanılarak analiz edilir.

Farelerde Aritmileri Tespit Etmek için Uzun Süreli Elektrokardiyografi Kayıtlarının Analizi

Mevcut protokol, farelerde atriyal fibrilasyon duyarlılığını değerlendirmek için transözofageal atriyal pacing kullanıldığında deneysel parametrelerin optimizasyonunu açıklamaktadır.

Farelerde Atriyal Fibrilasyon Duyarlılığını Değerlendirmek için Transözofageal Atriyal Pacing'in Optimizasyonu

Öğrenin farelerde sinoatrial düğüm mikroelektrod dizisi kaydı ile içsel kardiyak ateşleme hızını ölçme yöntemini. Bu teknik, pacemaking kusurlarını belirlemeye ve farmakolojik ajanların etkilerini incelemeye olanak tanır.

Farelerde İçSel Kardiyak Pacemaking Kusurlarını Belirlemek için Sinoatrial Düğüm Ateşleme Hızının Mikroelekrod Dizisi Kaydı

Daha fazla video keşfet