Name: Çoğullanmış Zebra Balığı Görüntüleme için Düşük Maliyetli Polietilen Tereftalat Laminasyon Mikroakışkan Tasarımları (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-09-27T14:45:00.000+00:00
Duration: 5 min 48 s
Description: Keşfedin düşük maliyetli PET laminasyon mikroakışkan cihaz tasarımını çoğullanmış Danio rerio görüntüleme için. Bu yöntem iltihaplanma ve yara iyileşmesindeki sinyal bütünleşmesini incelemeye olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>De Oliveira, S., Rosowski, E. E., Huttenlocher, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+migration+in+infection+and+wound+repair%3A+going+forward+in+reverse%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Neutrophil migration in infection and wound repair: going forward in reverse.</a> Nat Rev Immunol. 16 (6), 378-391 (2016).</li>
<li>Xu, S., Hsiao, T. I., Chisholm, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+wounded+worm%5BTitle%5D)+AND+%22Worm%22%5BJournal%5D)">The wounded worm.</a> Worm. 1 (2), 134-138 (2012).</li>
<li>Belacortu, Y., Paricio, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drosophila+as+a+model+of+wound+healing+and+tissue+regeneration+in+vertebrates%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Drosophila as a model of wound healing and tissue regeneration in vertebrates.</a> Dev Dyn. 240 (11), 2379-2404 (2011).</li>
<li>Yoo, S. K., Freisinger, C. M., LeBert, D. C., Huttenlocher, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+redox%2C+Src+family+kinase%2C+and+calcium+signaling+integrate+wound+responses+and+tissue+regeneration+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Early redox, Src family kinase, and calcium signaling integrate wound responses and tissue regeneration in zebrafish.</a> J Cell Biol. 199 (2), 225-234 (2012).</li>
<li>Kawakami, A., Fukazawa, T., Takeda, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+fin+primordia+of+zebrafish+larvae+regenerate+by+a+similar+growth+control+mechanism+with+adult+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Early fin primordia of zebrafish larvae regenerate by a similar growth control mechanism with adult regeneration.</a> Dev Dyn. 231 (4), 693-699 (2004).</li>
<li>Gault, W. J., Enyedi, B., Niethammer, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osmotic+surveillance+mediates+rapid+wound+closure+through+nucleotide+release%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Osmotic surveillance mediates rapid wound closure through nucleotide release.</a> J Cell Biol. 207 (6), 767-782 (2014).</li>
<li>Huemer, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((zWEDGI%3A+Wounding+and+entrapment+device+for+imaging+live+zebrafish+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">zWEDGI: Wounding and entrapment device for imaging live zebrafish larvae.</a> Zebrafish. 14 (1), 42-50 (2017).</li>
<li>Kaufmann, A., Mickoleit, M., Weber, M., Huisken, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multilayer+mounting+enables+long-term+imaging+of+zebrafish+development+in+a+light+sheet+microscope%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Multilayer mounting enables long-term imaging of zebrafish development in a light sheet microscope.</a> Development. 139 (17), 3242-3247 (2012).</li>
<li>Hirsinger, E., Steventon, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+versatile+mounting+method+for+long+term+imaging+of+zebrafish+development%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A versatile mounting method for long term imaging of zebrafish development.</a> J Vis Exp. (119), e55210(2017).</li>
<li>Wielhouwer, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+embryo+development+in+a+microfluidic+flow-through+system%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Zebrafish embryo development in a microfluidic flow-through system.</a> Lab Chip. 11 (10), 1815-1824 (2011).</li>
<li>Khalili, A., Rezai, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidic+devices+for+embryonic+and+larval+zebrafish+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Brief+Funct+Genomics%22%5BJournal%5D)">Microfluidic devices for embryonic and larval zebrafish studies.</a> Brief Funct Genomics. 18 (6), 419-432 (2019).</li>
<li>Choudhury, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fish+and+Chips%3A+a+microfluidic+perfusion+platform+for+monitoring+zebrafish+development%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">Fish and Chips: a microfluidic perfusion platform for monitoring zebrafish development.</a> Lab Chip. 12 (5), 892-900 (2012).</li>
<li>An integrated microfluidic system for zebrafish larva organs injection. Zhang, G., et al. Proceedings IECON 2017 - 43rd Annual Conference of the IEEE Industrial Electronics Society, 2017-January, , 8563-8566 (2017).</li>
<li>Erickstad, M., Hale, L. A., Chalasani, S. H., Groisman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+microfluidic+system+for+studying+the+behavior+of+zebrafish+larvae+under+acute+hypoxia%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Chip%22%5BJournal%5D)">A microfluidic system for studying the behavior of zebrafish larvae under acute hypoxia.</a> Lab Chip. 15 (3), 857-866 (2015).</li>
<li>Mani, K., Hsieh, Y. C., Panigrahi, B., Chen, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+noninvasive+light+driven+technique+integrated+microfluidics+for+zebrafish+larvae+transportation%5BTitle%5D)+AND+%22Biomicrofluidics%22%5BJournal%5D)">A noninvasive light driven technique integrated microfluidics for zebrafish larvae transportation.</a> Biomicrofluidics. 12 (2), 021101(2018).</li>
<li>Lee, Y., Seo, H. W., Lee, K. J., Jang, J. W., Kim, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+microfluidic+system+for+stable+and+continuous+EEG+monitoring+from+multiple+larval+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Sensors+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">A microfluidic system for stable and continuous EEG monitoring from multiple larval zebrafish.</a> Sensors (Basel). 20 (20), 5903(2020).</li>
<li>Sonnen, K. F., Merten, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidics+as+an+emerging+precision+tool+in+developmental+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Cell%22%5BJournal%5D)">Microfluidics as an emerging precision tool in developmental biology.</a> Dev Cell. 48 (3), 293-311 (2019).</li>
<li>Levis, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microfluidics+on+the+fly%3A+Inexpensive+rapid+fabrication+of+thermally+laminated+microfluidic+devices+for+live+imaging+and+multimodal+perturbations+of+multicellular+systems%5BTitle%5D)+AND+%22Biomicrofluidics%22%5BJournal%5D)">Microfluidics on the fly: Inexpensive rapid fabrication of thermally laminated microfluidic devices for live imaging and multimodal perturbations of multicellular systems.</a> Biomicrofluidics. 13 (2), 024111(2019).</li>
<li>E3 medium (for zebrafish embryos). <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Cold+Spring+Harbor+Protocols%22">Cold Spring Harbor Protocols</a>. 2011 (10), (2011).</li>
<li>Matthews, M., Varga, Z. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anesthesia+and+euthanasia+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Anesthesia and euthanasia in zebrafish.</a> ILAR J. 53 (2), 192-204 (2012).</li>
<li>Cronan, M. R., Tobin, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endogenous+tagging+at+the+cdh1+locus+for+live+visualization+of+E-cadherin+dynamics%5BTitle%5D)+AND+%22Zebrafish%22%5BJournal%5D)">Endogenous tagging at the cdh1 locus for live visualization of E-cadherin dynamics.</a> Zebrafish. 16 (3), 324(2019).</li>
<li>Thiele, T. R., Donovan, J. C., Baier, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Descending+control+of+swim+posture+by+a+midbrain+nucleus+in+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Descending control of swim posture by a midbrain nucleus in zebrafish.</a> Neuron. 83 (3), 679-691 (2014).</li>
<li>Yoo, S. K., Huttenlocher, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatiotemporal+photolabeling+of+neutrophil+trafficking+during+inflammation+in+live+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">Spatiotemporal photolabeling of neutrophil trafficking during inflammation in live zebrafish.</a> J Leukoc Biol. 89 (5), 661-667 (2011).</li>
<li>Chen, T. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasensitive+fluorescent+proteins+for+imaging+neuronal+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Ultrasensitive fluorescent proteins for imaging neuronal activity.</a> Nature. 499 (7458), 295-300 (2013).</li>
<li>Li, L., Yan, B., Shi, Y. -Q., Zhang, W. -Q., Wen, Z. -L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+imaging+reveals+differing+roles+of+macrophages+and+neutrophils+during+zebrafish+tail+fin+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Live imaging reveals differing roles of macrophages and neutrophils during zebrafish tail fin regeneration.</a> J Biol Chem. 287 (30), 25353-25360 (2012).</li>
<li>Mathias, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Resolution+of+inflammation+by+retrograde+chemotaxis+of+neutrophils+in+transgenic+zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J+Leukoc+Biol%22%5BJournal%5D)">Resolution of inflammation by retrograde chemotaxis of neutrophils in transgenic zebrafish.</a> J Leukoc Biol. 80, 1281-1288 (2006).</li>
<li>Levis, M., Ontiveros, F., Juan, J., Kavanagh, A., Zartman, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+fabrication+of+custom+microfluidic+devices+for+research+and+educational+applications%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Rapid fabrication of custom microfluidic devices for research and educational applications.</a> J Vis Exp. 2019, (2019).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>25 mm çapında yuvarlak kapak camı #1 kalınlık</td><td>Chemglass Yaşam Bilimleri</td><td>CLS-1760-025</td><td>Taban montaj malzemesi. Kalınlık, mikroskop merceğinin özelliklerine göre seçildi.</td></tr><tr><td>Adobe Illustrator v28.5</td><td>Adobe</td><td>N/A</td><td>Cihaz desenini tasarlamak için vektör düzenleyici.</td></tr><tr><td>Kalsiyum Klorür Dihidrat</td><td>Fisher</td><td>C79</td><td>E3 ortamı yapmak için.</td></tr><tr><td>PNG Dosyaları Tasarlayın (Çevrimiçi Ayna)</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>https://i.ibb.co/QPYj7BL/multipositionalv7-1.png https://i.ibb.co/FDpQYXc/multipositionalv7-2.png https://i.ibb.co/5TG4SB6/multipositionalv7-3.png</td></tr><tr><td>Masaüstü için Tasarım Alanı v8.39</td><td>Cricut</td><td>N/A</td><td>Zanaat kesiciyi sürmek için tescilli yazılım.</td></tr><tr><td>Fusion Plus 7000L</td><td>GBC</td><td>1703098</td><td>Termal laminatör. Bu özel model, maksimum sayfa yığını boyutu gibi yaşam kalitesi özellikleri için seçilmiştir.</td></tr><tr><td>Alman Karbür Premium Bıçak</td><td>Cricut</td><td>10396595</td><td>El sanatları kesici için yedek bıçak.</td></tr><tr><td>Gri Temel Alet Seti</td><td>Cricut</td><td>10307854</td><td>Kesilen kısımları ayıklamak, paspasları temizlemek ve PET levhaları monte etmek için alet seti. İsteğe bağlı.&nbsp;</td></tr><tr><td>Magnezyum Klorür Heksahidrat</td><td>Acros Organik</td><td>223211000</td><td>E3 ortamı yapmak için.</td></tr><tr><td>Maker 3</td><td>Cricut</td><td>10669040</td><td>El sanatları kesici. Cricut Maker 3, yazılım kullanıcı dostu olması nedeniyle Silhouette Cameo 4 yerine seçildi, ancak siyah beyaz görüntüleri okuyabilen herhangi bir zanaat kesici işe yarayacaktır.</td></tr><tr><td>MemGlow 560</td><td>Hücre İskeleti</td><td>MG02-10</td><td>Hücre zarları için kırmızı canlı hücre boyası. Yıkamaya gerek yok. Şekil 3'te kullanılmıştır.&nbsp;</td></tr><tr><td>No. 22 Karbon Neşter Bıçağı</td><td>Cerrahi Tasarım</td><td> 22-079-697</td><td>Manuel kesim ayarlamaları için neşter bıçağı. Benzer herhangi bir maket bıçağı (örneğin, X-acto #2 bıçağı) da işe yarayacaktır.</td></tr><tr><td>Potasyum Klorür</td><td>Fisher</td><td>BP366</td><td>E3 ortamı yapmak için.</td></tr><tr><td>Sodyum Klorür</td><td>Fisher</td><td>BP358</td><td>E3 ortamı yapmak için.</td></tr><tr><td>StandardGrip Yapışkanlı Kesme Matı Cricut</td><td></td><td>10138842</td><td>El sanatları kesici için montaj matı. LightGrip kesme matı da işe yarayacaktır, ancak StrongGrip ve FabricGrip kesme matlarından kaçının çünkü yapıştırıcının gücü, ayıklama ve çıkarma sırasında son kesimi çözebilir. Paspaslar üzerindeki yapıştırıcı, sürekli kullanımla sonunda aşınacaktır; Paspasları gerektiği gibi değiştirin.</td></tr><tr><td>Kırtasiye Bandı 12 mm</td><td>Deli</td><td>30014</td><td>Ofis bandı. Laminasyon sonrası çıkarma kolaylığı açısından testler yapılarak şarküteri markası seçilmiştir.</td></tr><tr><td>Süper yapıştırıcı, sıvı</td><td>Loctite</td><td>1364076</td><td>Siyanoakrilat tutkal. <Güçlü>Kullanılan tutkal sıvı.< / güçlü olmalıdır> Jel formülasyonları, cihaz kenarlarını yeterince sızdırmaz veya su geçirmez hale getirmez.</td></tr><tr><td>PET Termal Laminasyon Torbaları, termal</td> yapışkanlı 3 mil <td>Scotch</td><td>TP3854</td><td>PET levhalar. Çarşaflar sıkıştırılmış çiftler halinde gelir ve kullanımdan önce ayrılmalıdır. Yapışkan tarafı aşağı bakacak şekilde kesin.</td></tr><tr><td>PET Termal Laminasyon Torbaları, termal</td> yapışkanlı 5 mil <td>Scotch</td><td>TP5854</td><td>PET levhalar. Çarşaflar sıkıştırılmış çiftler halinde gelir ve kullanımdan önce ayrılmalıdır. Yapışkan tarafı aşağı bakacak şekilde kesin.</td></tr><tr><td>Trikain (MS-222)</td><td>Syndel</td><td>IC10310680</td><td>Balık anestezisi.</td></tr></tbody></table>

Çoğullanmış zebra balığı görüntüleme için düşük maliyetli polietilen tereftalat laminasyon mikroakışkan tasarımları

Low-cost Polyethylene Terephthalate Lamination Microfluidics Designs for Multiplexed Zebrafish Imaging

RADISH yardımı ile ve yardımı olmadan bir lazer tarama konfokali tarafından üretilen görüntü kalitesinin karşılaştırılması için, dış epitel tabakasında yoğun kalsiyum biyosensörü GCaMP6f22,24'ü eksprese eden embriyolar MemGlow 560 kullanılarak boyandı ve çerçeve başına 1 dakikalık bir zaman aralığında kuyruk yüzgeci kıvrımının tüm kalınlığını kaplayan ters lazer taramalı konfokal ile görüntülendi (Video 2). Cihaz olmadan (Şekil 3A), numuneler önemli ölçüde sürüklendi ve cihazla görüntülemeye kıyasla belirtilen zamansal çözünürlüğe sığması için Z yığınının 25 dilimle sınırlandırılmasından kaynaklanan bantlama artefaktları gösterdi (Şekil 3B). RAP ayrıca, Tg(krt4:Gal4, UAS:GCaMP6f) x (cdh1-dTomato)xt1821 eksprese eden embriyolarda yaralandıktan hemen sonra kalsiyum geçişlerini incelemek için kullanıldı ve kırmızıda endojen E-kaderin ve apikal epitelde yeşil renkte sitoplazmik kalsiyumun altını çizdi. Embriyolar, bir neşter bıçağı (Şekil 4A ve Video 3) veya bir IR lazer ile doğrudan lazer ablasyonu (Şekil 4B) kullanılarak merkezi odanın kenarlarına paralel olarak yaralandı, daha sonra kuyruk yüzgeci kıvrımının tam kalınlığı boyunca görüntülendi. 
RADISH'in daha uzun süreli görüntüleme için etkinliğini göstermek için, yaralamadan sonra 24 saat boyunca yara kenarına bağışıklık hücresi alımını araştırdık. Nötrofilleri yeşil23 olarak etiketlemek için Tol2(mpx:Dendra2) eksprese eden 3 dpf'de dört zebra balığı embriyosu kuyruk transeksiyonu ile yaralandı ve art arda 24 saat boyunca görüntülendi (Şekil 5). Tipik olarak geç 3 dpf ila 4 dpf embriyoları ile ilişkili, eğilme ve yüzme, özellikle yoktu (Video 4) ve doku yeniden büyümesi deney için engellenmeden devam etti. Yara kenarına nötrofil alımı görüntü boyunca devam eder (Şekil 5B), göç eden hücrelerin çoğu yaralamadan 24 saat sonra ayrılır (Şekil 5C), beklenen inflamasyon çözünürlüğü25,26 ile tutarlı olarak.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67313/67313fig01.jpg"> 
Şekil 1: PET laminat mikroakışkan cihazının (RADISH) tasarımı ve kullanımı. (A) Tek tek PET katmanlarının düzenini ve kalınlığını, montajını ve cihaz montajını ve kullanımını gösteren şema. (B) 35 mm'lik bir tabakta 3/4" oyuğa monte edilmiş nihai ürün. (C) 3 dpf embriyosu, (D) 5 dpf embriyosu, (E) cihazın içine yerleştirilmiş 14 dpf embriyosu. Ölçek çubukları = 1.000 μm (C,D,E). Kısaltmalar: PET = polietilen tereftalat; RADISH = sonraki iyileşmenin Danio görüntülemesi için rotasyon asistanı; dpf = döllenmeden sonraki gün sayısı. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67313/67313fig01large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67313/67313fig02.jpg"> 
Şekil 2: PET cihaz düzeneğinin adım adım fotoğrafik gösterimi. (A) Laminasyondan önce ayrı PET katmanları. (B) Ofis bandı kullanılarak 25 mm lamel ile sabitlenmiş PET katmanı. (C) Devam eden cihaz, laminasyon için plastik bir desteğe sabitlenmiştir. (D) Tamamlanmış PET laminat cihazı. (E) Cihaz montajından önce modifiye edilmiş 35 mm çanak. (F) Tamamlanmış cihaz. Kısaltma: PET = polietilen tereftalat. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67313/67313fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67313/67313fig03.jpg"> 
Şekil 3: RADISH tasarımında 3 dpf embriyosunun lazer taramalı konfokal görüntülerinin kalitesi iyileştirildi. (A) RADISH kullanılmadan MemGlow 560 ile boyanmış 3 dpf Tg(krt4:Gal4, UAS:GCaMP6f) embriyonun temsili görüntüsü. (B) RADISH'e monte edilmiş MemGlow 560 ile boyanmış Tg(krt4:Gal4, UAS:GCaMP6f) embriyosunun temsili görüntüsü. Ölçek çubuğu = 100 μm. Kısaltmalar: RADISH = sonraki iyileşmenin Danio görüntülemesi için rotasyon asistanı; dpf = döllenmeden sonraki gün sayısı. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67313/67313fig03large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67313/67313fig04.jpg"> 
Şekil 4: RADISH tasarımının çoklu yaralama teknikleriyle uyumluluğu. (A) 3 dpf Tg(krt4:Gal4, UAS:GCaMP6f) x (cdh1-dTomato)xt18 embriyo manuel kuyruk yüzgeci transeksiyonu ile yaralandı. (B) Lazer ablasyonu ile yaralanan embriyo. (C,D) Aynı embriyolar 4 dakika sonra, yaralamadan sonra kalsiyum geçişlerinin ilerlemesini gösterir. Ölçek çubukları = 100 μm. Kısaltmalar: RADISH = sonraki iyileşmenin Danio görüntülemesi için rotasyon asistanı; dpf = döllenmeden sonraki gün sayısı. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67313/67313fig04large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67313/67313fig05.jpg"> 
Şekil 5: Fagosit göçünün görüntülenmesi için embriyoların uzun süreli tuzaklanması. (A) Tol2 (mpx: Dendra2) embriyoları yaralamadan hemen sonra ve aynı embriyolar (B) 25 dakika, (C) 12 saat ve (D) 24 saat sonra. Ölçek çubukları = 100 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67313/67313fig05large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Ek Dosya 1: Şekil 1A'da gösterildiği gibi RADISH cihaz tasarımı için vektör ve PNG dosyaları. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67313/67313_Supp%20File%201.zip" target="_blank">Bu dosyayı indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Video 1: RADISH cihaz tasarımı kullanılarak manuel kuyruk yüzgeci transeksiyonunun parlak alan videosu. Kısaltma: RADISH = sonraki iyileşmenin Danio görüntülemesi için rotasyon asistanı. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67313/Movie%201.mp4" target="_blank">Bu videoyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Video 2: Şekil 3'ten 1 kare/dk'da elde edilen, monte edilmemiş ve monte edilmiş 3 dpf Tg(krt4:Gal4, UAS:GCaMP6f) embriyolarının karşılaştırılması. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67313/Movie%202.mp4" target="_blank">Bu videoyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Video 3: Şekil 4'ten neşter transeksiyonu veya lazer ablasyonu ile yaralanan Tg(krt4:Gal4, UAS:GCaMP6f) x (cdh1-dTomato)xt18 embriyolarındaki kalsiyum geçişleri, 1 kare/dk'da elde edildi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67313/Movie%203.mp4" target="_blank">Bu videoyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
Video 4: Tol2(mpx:Dendra2) embriyolarında lökosit alımı ve kuyruk yüzgeci rejenerasyonunun uzun süreli görüntülenmesi. Kısaltmalar: RADISH = sonraki iyileşmenin Danio görüntülemesi için rotasyon asistanı; hpw = yaralanmadan sonraki saat. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67313/Movie%204.mp4" target="_blank">Bu videoyu indirmek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Çoğullanmış Zebra Balığı Görüntüleme için Düşük Maliyetli Polietilen Tereftalat Laminasyon Mikroakışkan Tasarımları

Zebrafish embryos are transparent and thus uniquely suited for noninvasive intravital imaging of fundamental processes, such as wound healing and immune ...

low-cost-polyethylene-terephthalate-lamination-microfluidics-designs

Research

JoVE Journal

Biology

Basit bir mikroakışkan cihaz anestezik ücretsiz gerçekleştirmek için...

Için basit Mikroakışkan Cihazlar<em&gt; In vivo</emVe&gt; Görüntüleme<em&gt; C. elegans</em&gt;,<em&gt; Drosophila</em&gt; Ve Zebra balığı

Zebrabalıkları gelişimi embriyo düşük konsantrasyonlu agaroz ile optik bakımdan saydam bir plastik hortumlar gömülür ışık mikroskobu ile levha gün boyunca takip edilebilir.

Çok katmanlı Zebra balığı uzun vadeli Işık Sayfalık Mikroskopi için Montaj

Zebra balığı embriyolarının dokuya özel floresans yarı otomatik görüntüleme için bir protokol aşağıda tarif edilmiştir.

Zebra balığı Embriyolar Doku spesifik Floresans yarı otomatik Görüntüleme

Bu el yazması zWEDGI açıklar (Zebra balığı Wounding ve büyüme ve görüntüleme için tuzak aygıt), şark ve Zebra balığı larva dizginlemek için tasarlanmış bir compartmentalized alet olduğu. Tasarım kuyruk transeksiyon ve yara iyileşmesi ve rejenerasyon yüksek çözünürlüklü floresan mikroskopi görüntüleri uzun vadeli koleksiyonu izin verir.

Zebra balığı larva geliştirilmiş deneysel manipülasyon için uzun vadeli canlı görüntüleme aygıtı

Zebra balığı embriyo ve larva mikroenjeksiyon birçok Zebra balığı modellerinde kullanılan çok önemli ama zorlu bir tekniktir. Burada, Zebra balığı mikroenjeksiyon ve görüntüleme için yönünü ve istikrar içinde yardım etmek için microscale araçlar bir dizi mevcut.

Microstructured cihazlar için en iyi duruma getirilmiş mikroenjeksiyon ve Zebra balığı larva görüntüleme

Burada en az finansal ve zaman yatırımı ile özel mikroakışkan cihazlar tasarlamak ve imal etmek için bir protokol salıyoruz. Amaç, biyomedikal araştırma laboratuvarlarında ve eğitim ortamlarında mikroakışkan teknolojilerin benimsenmesini kolaylaştırmaktır.

Araştırma ve Eğitim Uygulamaları için Özel Mikroakışkan Cihazların Hızlı İmalatı

Bu makalede, uzun zaman atlamalı konfokal mikroskopi için kırılgan zebra balığı embriyoları monte etmek için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu düşük maliyetli yöntem herhangi bir ters mikroskop görüntüleme için düzenli cam alt mikroskopi yemekleri kullanarak gerçekleştirmek kolaydır. Montaj farklı konsantrasyonlarda agarose katmanları yapılır.

Tüm Zebrabalığı Embriyolarının Uzun Zaman Atlamalı Konfokal Mikroskobu için Katmanlı Montaj Yöntemi

Zebra balığı kalbinin in vivo ışık tabakası floresan mikroskopisi ile incelenmesi için optimize edilmiş araçlar açıklıyoruz. Özellikle, parlak kardiyak transgenik çizgiler öneriyoruz ve gelişimsel ve kalp kusurlarını önleyen yeni nazik gömme ve hareketsizleştirme teknikleri sunuyoruz. Kardiyak görüntülemeye uyarlanmış olası bir veri toplama ve analiz boru hattı da sağlanmaktadır.

Zebra Balığı Embriyolarında Hızlı Kardiyak Dinamiklerin Işık Tabakası Mikroskopisi

Bu protokol, zebra balığı larvalarında kardiyak kasılma fonksiyonunu araştırmak ve hücre izleme ve etkileşimli analiz yoluyla kalp mekaniği hakkında bilgi edinmek için ışık tabakası görüntülemeyi kullanır.

Zebra Balığı Kardiyak Kasılmasının 4D Işık Sayfası Görüntüleme

Erken zebra balığı embriyolarının bir ışık tabakası mikroskobu kullanılarak bozulmamış bir koryon içinde görüntülenmesi için bir örnek hazırlama stratejisi açıklanmaktadır. Embriyoların %70 epiboli ve tomurcuk aşamalarında koryon içinde edindiği farklı yönelimleri analiz eder ve ışık tabakası sistemini kullanarak embriyo boyunca hücresel ölçekte çözünürlük elde etmek için görüntüleme stratejilerini detaylandırır.

Erken Zebra Balığı Embriyoları için Işık Levha Mikroskobu Görüntüleme ve Montaj Stratejileri

Keşfedin düşük maliyetli PET laminasyon mikroakışkan cihaz tasarımını çoğullanmış Danio rerio görüntüleme için. Bu yöntem iltihaplanma ve yara iyileşmesindeki sinyal bütünleşmesini incelemeye olanak tanır.

Çoğullanmış Zebra Balığı Görüntüleme için Düşük Maliyetli Polietilen Tereftalat Laminasyon Mikroakışkan Tasarımları

Daha fazla video keşfet