Name: HeLa Hücreleri Kullanılarak Anti-MDA5 Otoantikorlarının Tespiti ve Işık Mikroskobu ile İmmünositokimya (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-31T14:05:00.000+00:00
Duration: 10 min 55 s
Description: Öğrenin, HeLa hücreleri ve immünositokimya kullanarak anti-MDA5 otoantikorlarını nasıl tespit edeceğinizi. Bu yöntem, miyozit ile ilişkili interstisyel akciğer hastalığının tanısında hızlı ve güvenilir sonuçlar sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol><li>Mehta, P., Machado, P. M., Gupta, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+and+managing+anti-MDA5+dermatomyositis%2C+including+potential+COVID-19+mimicry%5BTitle%5D)+AND+%22Rheumatol+Int%22%5BJournal%5D)">Understanding and managing anti-MDA5 dermatomyositis, including potential COVID-19 mimicry.</a> Rheumatol Int. 41 (6), 1021-1036 (2021).</li>
<li>Tansley, S. L., McHugh, N. J., Wedderburn, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adult+and+juvenile+dermatomyositis%3A+are+the+distinct+clinical+features+explained+by+our+current+understanding+of+serological+subgroups+and+pathogenic+mechanisms%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Res+Ther%22%5BJournal%5D)">Adult and juvenile dermatomyositis: are the distinct clinical features explained by our current understanding of serological subgroups and pathogenic mechanisms.</a> Arthritis Res Ther. 15 (2), 211(2013).</li>
<li>Fujisawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Management+of+myositis-associated+interstitial+lung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Medicina%22%5BJournal%5D)">Management of myositis-associated interstitial lung disease.</a> Medicina. 57 (4), 347(2021).</li>
<li>Sasaki, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+initiation+of+plasma+exchange+therapy+for+a+patient+with+anti-MDA5+autoantibody-positive+dermatomyositis+developing+rapidly+progressive+interstitial+lung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Mod+Rheumatol+Case+Rep%22%5BJournal%5D)">Early initiation of plasma exchange therapy for a patient with anti-MDA5 autoantibody-positive dermatomyositis developing rapidly progressive interstitial lung disease.</a> Mod Rheumatol Case Rep. 5 (1), 87-92 (2021).</li>
<li>Go, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survival+benefit+associated+with+early+cyclosporine+treatment+for+dermatomyositis-associated+interstitial+lung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Rheumatol+Int%22%5BJournal%5D)">Survival benefit associated with early cyclosporine treatment for dermatomyositis-associated interstitial lung disease.</a> Rheumatol Int. 36 (2), 125-132 (2015).</li>
<li>Tsuji, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multicenter+prospective+study+of+the+efficacy+and+safety+of+combined+immunosuppressive+therapy+with+high-dose+glucocorticoid%2C+tacrolimus%2C+and+cyclophosphamide+in+interstitial+lung+diseases+accompanied+by+anti-melanoma+differentiation-associated+gene+5-positive+dermatomyositis%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">Multicenter prospective study of the efficacy and safety of combined immunosuppressive therapy with high-dose glucocorticoid, tacrolimus, and cyclophosphamide in interstitial lung diseases accompanied by anti-melanoma differentiation-associated gene 5-positive dermatomyositis.</a> Arthritis Rheumatol. 72 (3), 488-498 (2020).</li>
<li>Hozumi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+assessment+of+myositis-specific+autoantibodies+in+polymyositis%2Fdermatomyositis-associated+interstitial+lung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Respir+Med%22%5BJournal%5D)">Comprehensive assessment of myositis-specific autoantibodies in polymyositis/dermatomyositis-associated interstitial lung disease.</a> Respir Med. 122, 1-8 (2016).</li>
<li>Nakashima, R., Hosono, Y., Mimori, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+significance+and+new+detection+system+of+autoantibodies+in+myositis+with+interstitial+lung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Lupus%22%5BJournal%5D)">Clinical significance and new detection system of autoantibodies in myositis with interstitial lung disease.</a> Lupus. 25 (8), 925-933 (2016).</li>
<li>Koga, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+diagnostic+utility+of+anti-melanoma+differentiation-associated+gene+5+antibody+testing+for+predicting+the+prognosis+of+Japanese+patients+with+DM%5BTitle%5D)+AND+%22Rheumatology%22%5BJournal%5D)">The diagnostic utility of anti-melanoma differentiation-associated gene 5 antibody testing for predicting the prognosis of Japanese patients with DM.</a> Rheumatology. 51 (7), 1278-1284 (2012).</li>
<li>Fuzzi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-MDA5+dermatomyositis%3A+an+update+from+bench+to+bedside%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">Anti-MDA5 dermatomyositis: an update from bench to bedside.</a> Curr Opin Rheumatol. 34 (6), 365-373 (2022).</li>
<li>Sato, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoantibodies+to+a+140-kd+polypeptide%2C+CADM-140%2C+in+Japanese+patients+with+clinically+amyopathic+dermatomyositis%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">Autoantibodies to a 140-kd polypeptide, CADM-140, in Japanese patients with clinically amyopathic dermatomyositis.</a> Arthritis Rheum. 52 (5), 1571-1576 (2005).</li>
<li>Tansley, S. L., Diederichsen, L. P., Zampeli, V. A., McHugh, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+reliability+of+immunoassays+to+detect+autoantibodies+in+patients+with+myositis+is+dependent+on+autoantibody+specificity%5BTitle%5D)+AND+%22Rheumatology%22%5BJournal%5D)">The reliability of immunoassays to detect autoantibodies in patients with myositis is dependent on autoantibody specificity.</a> Rheumatology. 59 (5), 1029-1034 (2020).</li>
<li>Chen, Y. L., Li, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positive+predictive+value+of+myositis+antibody+line+blot+testing+in+patients+with+suspected+idiopathic+inflammatory+myopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">Positive predictive value of myositis antibody line blot testing in patients with suspected idiopathic inflammatory myopathy.</a> Muscle Nerve. 69 (3), 345-350 (2024).</li>
<li>Nombel, A., Pin, J. J., Fabien, N., Miossec, P., Coutant, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+performance+of+an+indirect+immunofluorescence+assay+for+the+detection+of+anti-MDA5+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Biomedicines%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the performance of an indirect immunofluorescence assay for the detection of anti-MDA5 antibodies.</a> Biomedicines. 10 (12), 3125(2022).</li>
<li>Nakashima, R., Hosono, Y., Mimori, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+significance+and+new+detection+system+of+autoantibodies+in+myositis+with+interstitial+lung+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Lupus%22%5BJournal%5D)">Clinical significance and new detection system of autoantibodies in myositis with interstitial lung disease.</a> Lupus. 25 (8), 925-933 (2016).</li>
<li>Sato, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoantibodies+to+a+140-kd+polypeptide%2C+CADM-140%2C+in+Japanese+patients+with+clinically+amyopathic+dermatomyositis%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">Autoantibodies to a 140-kd polypeptide, CADM-140, in Japanese patients with clinically amyopathic dermatomyositis.</a> Arthritis Rheum. 52 (5), 1571-1576 (2005).</li>
<li>Chang, Y. C., Yang, L., Budhram, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Positive+predictive+value+of+myositis+antibody+line+blot+testing+in+patients+with+suspected+idiopathic+inflammatory+myopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Muscle+Nerve%22%5BJournal%5D)">Positive predictive value of myositis antibody line blot testing in patients with suspected idiopathic inflammatory myopathy.</a> Muscle Nerve. 69 (5), 626-630 (2024).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>24 kuyuyla levhalar (1.9 cm&sup2;/kuyruk)</td><td>Corning</td><td>354541</td><td></td></tr><tr><td>Antibiyotik-antimikotik</td><td>Gibco</td><td>15240062</td><td></td></tr><tr><td>Beakers</td><td>BORCAM</td><td>1000-600</td><td></td></tr><tr><td>Konik tüpler (15 mL)</td><td>Corning</td><td>430052</td><td></td></tr><tr><td>Konik tüpler (50 mL)</td><td>Corning</td><td>430290</td><td></td></tr><tr><td>Deionize edilmiş damıtılmış su</td><td></td><td></td><td>Deionize edilmiş damıtılmış suyumuz, Milli-Q sistemi kullanılarak (Sütun 1: Kuantum TEX, SN: F4EB53476; Sütun 2: Prepak, SN: F1CB11442)</td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu Karakterize Edildi</td><td>Cytiva</td><td>SH30396.03</td><td></td></tr><tr><td>dereceli silindirler (50 mL)</td><td>VITLAB</td><td>64804</td><td></td></tr><tr><td>Hematoksilin Gill II</td><td>Leica</td><td>3801522</td><td></td></tr><tr><td>Hyclone Dulbecco' s Yüksek glikozlu Modifiye Kartal Ortamı</td><td>Cytiva</td><td>SH30243.02</td><td></td></tr><tr><td>Lipofectamin 2000 transfeksiyon reaktifi</td><td>Invitrogen</td><td>11668019</td><td>Transfeksiyon reaktifi</td></tr><tr><td>MDA-5 (D74E4) Tavşan mAb</td><td>Hücre Sinyal Teknolojisi</td><td>5321</td><td></td></tr><tr><td>Mikrosantrifüj tüpleri (1.5 mL Eppendorf tüpleri)</td><td>AXYGEN</td><td>142503</td><td></td></tr><tr><td>Opti-MEM I indirgenmiş serum ortamı</td><td>Gibco</td><td>31985070</td><td></td></tr><tr><td>Yörünge sallayıcısı (isteğe bağlı)</td><td>FIRSTEK</td><td>S300R</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>1x PBS'de %4</td></tr><tr><td>PBS</td><td>PROFESYONEL TECH</td><td>ME222605</td><td></td></tr><tr><td>pENTER-MDA5</td><td>Vigene Biosciences Inc.</td><td>CH863586</td><td></td></tr><tr><td>Peroksidaz AfiniSaf Keçi İnsan Karşıtı IgG (H+L)</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>109-035-003</td><td></td></tr><tr><td>Pipet kontrolcüsü</td><td>Termo Bilimsel</td><td>130165</td><td></td></tr><tr><td>Pipetler&nbsp;</td><td>GILSON</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipetler ve pipet uçları (10 & mikro; L)</td><td>QSP</td><td>104-Q</td><td></td></tr><tr><td>Pipetler ve pipet uçları (200 &micro; L)</td><td>QSP</td><td>T090-Q</td><td></td></tr><tr><td>Pipetler ve pipet uçları (1000 &micro; L)</td><td>QSP</td><td>111-Q</td><td></td></tr><tr><td>Serolojik pipetler (5 mL)</td><td>SPL</td><td>91005</td><td></td></tr><tr><td>Serolojik pipetler (10 mL)</td><td>SPL</td><td>91010</td><td></td></tr><tr><td>Serolojik pipetler (25 mL)</td><td>SPL</td><td>91025</td><td></td></tr><tr><td>SignalStain DAB substrat kiti</td><td>Hücre sinyalizasyonu</td><td>8059</td><td>PBS'de %0,3</td></tr></tbody></table>

hela hücreleri kullanılarak anti-mda5 otoantikorlarının tespiti ve işık mikroskobu ile İmmünositokimya

Detection of Anti-MDA5 Autoantibodies Using HeLa Cells and Immunocytochemistry with Light Microscopy

Testleri yürüten personel, değerlendirme sürecindeki olası yanlılığı en aza indirmek için, numunelerin alındığı belirli hastalar da dahil olmak üzere numunelerin kimliklerine kör edildi. Bununla birlikte, sağlıklı kontrol numuneleri körlemeye tabi tutulmazken, sürekli olarak açık ve kesin sonuçlar verdiler.
Şekil 1A , pENTER-MDA5 yapısı ile transfekte edilmiş HeLa hücrelerinde MDA5'in başarılı ekspr...

HeLa Hücreleri Kullanılarak Anti-MDA5 Otoantikorlarının Tespiti ve Işık Mikroskobu ile İmmünositokimya

Anti-MDA5 autoantibodies are critical biomarkers for dermatomyositis (DM), amyopathic dermatomyositis (CADM), and polymyositis (PM), particularly in ...

detection-anti-mda5-autoantibodies-using-hela-cells

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Son yıllarda, canlı hücre bazlı deneyler, yüzey ve şekilsel antijenlere karşı antikorlar tespit etmek için başarılı bir şekilde kullanılmıştır. Burada, hastaların büyük kuşaklarının analiz sağlayarak sitometri yüksek verimli akışını kullanarak bir yöntem açıklanmaktadır. Yeni antikorların tespiti immün aracılı bozuklukların tanı ve tedavi artıracaktır.

İnsan Serum içinde N-metil-D-aspartat reseptör ya da dopamin-2 reseptör antikorları algılamak üzere yüksek verimli Flow Cytometry hücre bazlı bir deneyde

Burada, kırmızı kan hücrelerine karşı antikorlar tarafından neden olunan kompleman aktivasyon ölçmek için iki tahlil tarif eder. Mevcut deneylerde üzerinde en büyük avantajı, nicel ve kolay yorumlamak doğasıdır.

Kırmızı kan hücreleri üzerinde antikor kaynaklı kompleman aktivasyon sayısal tespiti için Yöntemler

MHC kompleksi sınıf II dextramers ile direkt boyama ile beyin ve kalp kendinden reaktif CD4 T hücreleri algılamak için protokol bu raporda tarif edilmiştir. Kapsamlı bir analiz için in situ antijene özgü CD4 + T hücrelerinin frekansları numaralandırmak için güvenilir bir yöntem de planlanmaktadır.

Majör Histo-uyum Kompleks sınıf II Dextramers kullanarak Beyin ve Heart reaktif CD4 T hücrelerinin in situ tespiti

Viral yüzey antijenleri konformasyonlarını anlamak, antikor nötralizasyonunu değerlendirmek ve etkili aşı immünojenlerinin tasarımına rehberlik etmek için gereklidir. Burada, spesifik anti-Env antikorları tarafından transfekte edilmiş hücrelerin yüzeyinde eksprese edilen trimerik HIV-1 Env'nin tanınmasının çalışmasına izin veren hücre bazlı bir ELISA testini açıklıyoruz.

Bir Hücre temelli bir ELISA testi kullanarak, HIV-1 zarf trimerik Glikoproteinler konformasyonel Değerlendirilmesi

Bozulmamış sınıf I HLA / peptit kompleksleri potansiyel ilgili kanser biyobelirteç temsil, kanser hücreleri tarafından dökülür. Monoklonal antikorlar, atkı aralığı MIF / HLA-A saptanmasını taklit etiketi içermeyen sensör teknolojisi ve T-hücresi reseptörü kullanmak * 02: MDA-MB-231 hücre süpernatantlan içinde 01 kompleksleri, insan serumu katıldı ve hastanın plazma gelişmesine olanak gösterilmektedir Bir roman kanseri teşhis platformu.

Etiket-ücretsiz Biyosensör Teknolojisi kullanılması Meme Kanserinde İnsan Lökosit Antijen BİYOMARKÖRLERİN Algılama

Burada, insanlardan ve farelerden serum IgG ve IgM otoantikorlarının aynı anda tespiti için kullanılabilecek özelleştirilebilir antijen mikrodizileri oluşturmak için bir yöntem açıklıyoruz. Bu diziler, ilgilenilen herhangi bir antijene veya epitopa karşı antikorların yüksek verimli ve kantitatif tespitine izin verir.

IgG ve IgM Antikorlarının Eşzamanlı Algılama için İki Renkli Antijen Mikroarray&#39;ler Üretimi

NR1 alt birim NMDA reseptör karşı otoantikorlar ile otoimmün ensefalit şüphesi hastaların kan algılamak için antijen olarak insan embriyonik hücreleri (HEK293) yeşil flüoresan protein tagged NMDA reseptör ectopically dile getirdi. Bu basit yöntem klinik ayarları, amacıyla filtreleme için uygun olabilir.

N-metil-D-Aspartat (NMDA) reseptör karşı antikor kanında tespit etmek için basit hücre tabanlı ayirt tahlil

DFS70 otoantikorlar doğru yorumu geleneksel HEp-2 yüzeylerde kullanırken zorlu yapma ortak enerjiye antikor hastalık ilişkili kalıpları taklit. Protokol üzerinden geleneksel HEp-2 eleme ve hem monospecific hem de karma ANA olumlu durumlarda yüksek güven ile DFS70 desenleri ayırt ANA'roman mühendislik HEp-2 substrat avantajları açıklar.

Monospecific ve karışık DFS70 desen bir roman hepatit-2 ELITE/DFS70 nakavt substrat ile birlikte ANA tarama sırasında eşzamanlı ayrım

Bu çalışmada, BALB/c farelerde, bu hastalıkta görülen cinsiyet farklılıkları da dahil olmak üzere ilaca bağlı otoimmün hepatitin patogenezini incelemek için kullanılabilecek bir in vivo immünizasyon, translasyonel hepatit modeli tanımlanmıştır. Bu modelin in vivo ve in vitro deneysel teknikler kullanarak tekrarlanabilir analizleri nasıl gösterdiğini açıklayacağız.

Patojenik Mekanizmalarının İncelenmesi için BALB/c Farelerde İlaca Bağlı, Otoimmün Hepatitin İndüklenmesi

Bu makalede, alkalen fosfataz konjuge ScFv D11 antikoru kullanılarak immünofloresan yoluyla dokulardaki izolevuglandinlerin ölçümü için ayrıntılı bir metodoloji sunulmaktadır. Hem farelerde hem de insanlarda hipertansiyon modelleri, doku örneklerinde izolevuglandin ölçümü ile ilişkili adım adım prosedürleri ve temel ilkeleri açıklamak için kullanılır.

D11 scFv-alkalen fosfataz füzyon proteini ve immünofloresan kullanılarak dokulardaki izolevuglandinlerin doğrudan tespiti

Mycoplasma pneumoniae enfeksiyonunda, seroloji testleri immünolojik çapraz reaksiyon nedeniyle düşük özgüllükle iyi sonuçlar verebilir. Bu yazıda açıklanan kurum içi antijen yakalama ELISA, yüksek tür özgüllüğünü garanti eder ve M. pneumoniae'nin doğru teşhisi için güvenilir bir tarama testi olduğu gösterilmiştir.

Mycoplasma pneumoniae'nin Spesifik Tespiti için Antijen Yakalama Enzimine Bağlı İmmünosorbent Testi

Öğrenin, HeLa hücreleri ve immünositokimya kullanarak anti-MDA5 otoantikorlarını nasıl tespit edeceğinizi. Bu yöntem, miyozit ile ilişkili interstisyel akciğer hastalığının tanısında hızlı ve güvenilir sonuçlar sağlar.

HeLa Hücreleri Kullanılarak Anti-MDA5 Otoantikorlarının Tespiti ve Işık Mikroskobu ile İmmünositokimya

Daha fazla video keşfet