Name: Memeli Gen Ekspresyonunu Kontrol Etmek için Işıkla İndüklenebilir Bir Sistemin Hızlı Optimizasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-04T14:15:00.000+00:00
Duration: 9 min 8 s
Description: Öğrenin, 3D baskılı LED dizisi kullanarak HEK293T hücrelerinde ışıkla indüklenebilir gen ekspresyonunu optimize etme yöntemini. Bu yüksek verimli optogenetik yaklaşım, memeli hücrelerinde gen düzenlemesi araştırmalarını hızlandırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<table><tbody><tr><td>1,5 mL mikrosantrifüj tüpleri</td><td>VWR</td><td>10025-724</td><td></td></tr><tr><td>10 mL Reaktif Rezervuarları</td><td>VWR</td><td>77395-252</td><td></td></tr><tr><td>10 mL serolojik pipetler</td><td>VWR</td><td>75816-100</td><td></td></tr><tr><td>1000 &mu; L filtre uçları</td><td>VWR</td><td>76322-154</td><td></td></tr><tr><td>15 mL&nbsp; Yüksek Performanslı Santrifüj Tüpleri, düz kapaklı</td><td>VWR</td><td>89039-664</td><td></td></tr><tr><td>1931-C Optik Güç Ölçeri</td><td>Newport</td><td>1931-C</td><td></td></tr><tr><td>2 mL serolojik pipetler</td><td>VWR</td><td>75816-104</td><td></td></tr><tr><td>20 &mu; L filtre uçları</td><td>VWR</td><td>76322-134</td><td></td></tr><tr><td>200 &mu; L filtre uçları</td><td>VWR</td><td>76322-150</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Yüksek Performanslı Santrifüj Tüpleri, düz kapaklı</td><td>VWR</td><td>89039-656</td><td></td></tr><tr><td>96 kuyruklu v-alt plakalar</td><td>BRANDplates</td><td>781661</td><td></td></tr><tr><td>A21, LED Kırmızı ampul</td><td>Bluex Ampulleri</td><td>Yok</td><td>Kırmızı ışık kaynağı</td></tr><tr><td>Arduino IDE Software</td><td>Arduino</td><td>Yok</td><td></td></tr><tr><td>Biyogüvenlik Kabinası, Sınıf II</td><td>NuAire</td><td>Yok</td><td></td></tr><tr><td>Parlak Çizgi Hemositometresi</td><td>Hausser Scientific</td><td>3110</td><td></td></tr><tr><td>Hücre sayma slaytları</td><td>BioRad</td><td>1450016</td><td></td></tr><tr><td>Hücre Kültürü Plakası 96-kuyuk, #1.5H cam alt plaka</td><td>Cellvis</td><td>P96-1.5H-N</td><td></td></tr><tr><td>CytExpert Yazılımı</td><td>Beckman Coulter</td><td>Yok</td><td></td></tr><tr><td>CytoFLEX Günlük Kullanıma Hazır QC Fluorosferler</td><td>Beckman Coulter</td><td>C65719</td><td>4 derece ve derece; C</td></tr><tr><td>CytoFLEX-S Akış Sitometresi (4 menekşe, 2 mavi, 4 sarı yeşil, 3 kırmızı kanal)</td><td>Beckman Coulter</td><td>C09766</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco'nun Fosfatla Tamponlu Salin Tozu, kalikum yok, magnezyum yok</td><td>Fisher Scientific</td><td>21600069</td><td>Oda Sıcaklığı</td></tr><tr><td>Eppendorf Santrifüj 5804</td><td>Eppendorf</td><td>&nbsp; 022622501</td><td>V-taban plaka santrifüj adımı</td></tr><tr><td>Eppendorf Santrifüj 5810R</td><td>Eppendorf</td><td>22625501</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Research plus, 8 kanallı, değişken hacimli, 30 - 300 &mu; L</td><td>Eppendorf</td><td>3125000052</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Research plus, tek kanallı, değişken hacimli, 100 - 1000 &mu; L</td><td>Eppendorf</td><td>3123000063</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Research plus, tek kanallı, değişken hacimli, 2 - 20 &mu; L</td><td>Eppendorf</td><td>3123000039</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf Research plus, tek kanallı, değişken hacimli, 20 - 200 &mu; L</td><td>Eppendorf</td><td>3123000055</td><td></td></tr><tr><td>Genel Amaçlı Laboratuvar Etiketleme Bandı</td><td>VWR</td><td>89097-920</td><td></td></tr><tr><td>Gibco DMEM, toz, yüksek glikoz</td><td>Fisher Scientific</td><td>12100061</td><td>4 derece ve derece; C</td></tr><tr><td>Gibco Trypan Blue Çözeltisi, %0,4</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-250-061</td><td>Oda Sıcaklığı</td></tr><tr><td>Gibco Value Isı İnaktif Olmayan FBS</td><td>Fisher Scientific</td><td>A5256901</td><td>-20 derece ve derece; C</td></tr><tr><td>Gibco, Tripsin-EDTA (%0,05) ile EDTA, Hayvansal Kökenli, 1X, Fenol Kırmızı, 500 mL</td><td>Gibco</td><td>25300062</td><td>-20 derece ve derece; C</td></tr><tr><td>HEK293T Hücreleri</td><td>ATCC</td><td>CRL-11268</td><td>-80 ve derece; C, Sıvı Azot</td></tr><tr><td>Laboratuvar işaretleyicileri, Micronova</td><td>VWR</td><td>89205-944</td><td></td></tr><tr><td>Metal Masa Lambası</td><td>Basit Tasarımlar</td><td>Yok</td><td>Kırmızı ışık lambası</td></tr><tr><td>OptoPlate-96</td><td>LABmaker</td><td>Yok</td><td></td></tr><tr><td>Pipet-aid XP</td><td>Drummond</td><td>4-000-101</td><td></td></tr><tr><td>Plazmid: CIBN-gRNA</td><td>Yok</td><td>Yok</td><td>-20 derece ve derece; C</td></tr><tr><td>Plazmid: CMV-eGFP</td><td>Yok</td><td>Yok</td><td>-20 derece ve derece; C</td></tr><tr><td>Plazmid: CRY2-eGFP</td><td>Yok</td><td>Yok</td><td>-20 derece ve derece; C</td></tr><tr><td>PolyJet DNA In Vitro Transfeksiyon Reaktifi</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC1536117</td><td>4 derece ve derece; C</td></tr><tr><td>T-75 Hücre Kültürü Termosu</td><td>VWR</td><td>10062-860</td><td></td></tr><tr><td>Su Kaplamalı CO2 Kuluçka Makinesi</td><td>VWR</td><td>10810-884</td><td></td></tr></tbody></table>

memeli gen ekspresyonunu kontrol etmek için işıkla İndüklenebilir bir sistemin hızlı optimizasyonu

Rapid Optimization of a Light-Inducible System to Control Mammalian Gene Expression

Memeli Gen Ekspresyonunu Kontrol Etmek için Işıkla İndüklenebilir Bir Sistemin Hızlı Optimizasyonu

Inducible gene expression tools can open novel applications in human health and biotechnology, but current options are often expensive, difficult to ...

rapid-optimization-light-inducible-system-to-control-mammalian-gene

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Bu video, bir fare modelinde tetrasiklin veya Tet-On gen ekspresyon sistemini göstermektedir. Bir tetrasiklin türevi olan doksisiklin varlığında, ters tetrasiklin kontrollü transaktivatör proteinden oluşan Tet-On sistemi aktive olur ve ilgilenilen geni eksprese eder.

İndüklenebilir Tet-On Düzenlenebilir Sistem Tabanlı In Vivo: Fare Modelinde Hedef Gen Transkripsiyon Aktivasyonu için Tetrasiklin Kaynaklı Bir Gen Ekspresyon Sistemi

Bu protokol soydaş GFP gazetecilere ve flow sitometri aracılığı GFP ifade uyarmak için atfs yeteneği ölçümü ile yapay transkripsiyon faktörleri (atfs) hızlı inşası için deneysel bir prosedür açıklanmaktadır.

Hızlı Sentezi ve GFP-tabanlı Muhabirleri ile Kimyasal Aktif Transkripsiyon Faktörleri Taraması

Burada açıklanan yöntem, bir anti-apoptotik bakteriyel efektör proteinin aktivitesini incelemek için tanımlanmış adımlarda apoptotik sinyal kaskadını indüklemek için kullanılır. Bu yöntem aynı zamanda pro-apoptotik veya toksik proteinlerin indüklenebilir ekspresyonu için veya diğer sinyal yollarıyla etkileşimi incelemek için de kullanılabilir.

Bir uyarılabilir İfade Sistemi uygulamak Hücre içi Sinyali ile Bakteriyel Virulans Faktörler Girişim Eğitim için

Bu protokol, hücre farklılaşması ve Xenopus embriyonik gelişimi sırasında mitojenle aktive protein kinaz (MAPK) aktivitesini modüle etmek için bir optogenetik strateji tanımlamaktadır. Bu yöntem, yüksek mekansal ve zamansal çözünürlüğe sahip Xenopus embriyoları gibi memeli hücre kültüründe ve çok hücreli canlı organizmalarda MAPK sinyal yolağının geri dönüşümlü aktivasyonuna izin verir.

Hücre Farklılaştırması Sırasında Mitojenle Aktive Edilen Protein Kinaz Yolunun Hafif-Uyumlu Geri Dönüşümlü Modülasyonu ve<em&gt; Xenopus</em&gt; Embriyonik Gelişim

Burada, salınım bilgi hücre hücre aktarımı optogenetic denetimi tarafından analiz ve gen ifadesi izleme yaşamak için bir protokol mevcut. Bu yaklaşım çok hücreli sistemlerinde fonksiyonel önemini dinamik gen ifade programları test etmek için benzersiz bir platform sağlar.

Bir Optogenetic kontrol etmek ve hücre-hücre etkileşimleri gen ifade desenleri analiz yöntemi

Bu iletişim kuralı canlı hayvan veya gelişmiş lac önleyici ve/veya tet harekete geçirmek sistemleri kullanarak hücreleri içinde ilgi endojen bir gen transkripsiyonu koşullu olarak kontrol edilebilir bir modeli sistemi oluşturmak için gereken adımları açıklar.

Uzaktan kumandalı sistem in vivo uygulama için işleme endojen gen ekspresyonu

Işığa duyarlı memeli hücrelerini güvenilir bir şekilde kontrol etmek, optogenetik yöntemlerin standardizasyonunu gerektirir. Bu amaca yönelik olarak, bu çalışma, negatif geri beslemeli bir optogenetik gen devresini vaka çalışması olarak kullanarak ışığa bağlı gen ekspresyonunun çalışmasını standartlaştırmak için gen devresi yapımı, hücre mühendisliği, optogenetik ekipman çalışması ve doğrulama testlerinin bir boru hattını özetlemektedir.

Memeli Hücrelerinde Kararlı Optogenetik Gen Devrelerinin Güvenilir Mühendisliği ve Kontrolü

Optogenetik, geniş kapsamlı uygulamalara sahip güçlü bir araçtır. Bu protokol, mavi ışığa duyarlı TAEL/C120 sistemini kullanarak zebra balığı embriyolarında ışık indüklenmez gen ekspresyonuna nasıl ulaşılacağını göstermektedir.

Optogenetik TAEL/C120 Sistemini Kullanan Zebra Balığı Embriyolarında Işık Kaynaklı GFP İfadesi

Küçük moleküllü bir substratı oksitleyen bir lusiferaz enzimi tarafından yayılan biyolüminesans ışığı, bir lusiferin, fotosensoriyel proteinleri aktive etmek için kullanılabilir, böylece ışık stimülasyonuna başka bir boyut ekler ve hücrelerde zamansal ve mekansal ölçeklerde çok sayıda ışık aracılı fonksiyonun manipülasyonunu sağlar.

Biyolüminesan Optogenetik 2.0: Fotosensör Proteinleri In Vitro ve In Vivo'yu Aktive Etmek için Biyolüminesanstan Yararlanma

Mikrobiyal metabolizmanın optogenetik kontrolü, fermantasyon süreçleri üzerinde esnek dinamik kontrol sağlar. Buradaki protokol, farklı hacimsel ölçeklerde kimyasal ve protein üretimi için mavi ışık ayarlı fermantasyonların nasıl kurulacağını göstermektedir.

Mikrobiyal Kimyasal ve Protein Üretimi için Işık Kontrollü Fermantasyonlar

Bu protokol, protein aktivitesinin tersinir uzay-zamansal kontrolü için tasarlanmış bir mavi ışıkla aktive edilen allosterik anahtar (LightR) alanının uygulamasını açıklar. Src tirozin kinazını bir model olarak kullanan bu çalışma, ışık regüle edilmiş Src'yi (LightR-Src) geliştirmek ve karakterize etmek için ayrıntılı bir protokol sunmaktadır. Bu yaklaşımın enzim sınıfları arasında çok yönlülüğünü göstermektedir.

Optogenetik Allosterik Regülasyon Yoluyla Protein Aktivitesinin Uzay-Zamansal Kontrolü

Öğrenin, 3D baskılı LED dizisi kullanarak HEK293T hücrelerinde ışıkla indüklenebilir gen ekspresyonunu optimize etme yöntemini. Bu yüksek verimli optogenetik yaklaşım, memeli hücrelerinde gen düzenlemesi araştırmalarını hızlandırır.

Memeli Gen Ekspresyonunu Kontrol Etmek için Işıkla İndüklenebilir Bir Sistemin Hızlı Optimizasyonu

Daha fazla video keşfet